| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩写 | 第9-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-24页 |
| 一、ABC模型研究进展 | 第11-17页 |
| 1、同源异型基因 | 第11-12页 |
| 2、同源异型基因和ABC模型 | 第12-13页 |
| 3、ABC模型的研究进展 | 第13-17页 |
| 二、植物MADS BOX基因研究进展 | 第17-22页 |
| 1、MADS box基因的起源、进化 | 第17-18页 |
| 2、MADS box基因的结构特性 | 第18-19页 |
| 3、植物MADS box基因的功能 | 第19页 |
| 4、植物MADS box基因的分类 | 第19-20页 |
| 5、植物MADS box基因的分布 | 第20页 |
| 6、植物MADS box基因参与植物花发育的调控 | 第20-21页 |
| 7、植物MADS box基因的生物学功能及其多效性 | 第21页 |
| 8、植物MADS box基因研究存在的问题与展望 | 第21-22页 |
| 三、本实验研究目的 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-41页 |
| 一、实验材料 | 第24-26页 |
| 1、植物材料 | 第24页 |
| 2、菌株 | 第24页 |
| 3、质粒载体 | 第24页 |
| 4、酶、抗生素及各种试剂 | 第24页 |
| 5、培养基的配制 | 第24-25页 |
| 6、常用抗生素母液浓度 | 第25页 |
| 7、常用溶液 | 第25-26页 |
| 8、引物 | 第26页 |
| 9、实验中所用试剂盒 | 第26页 |
| 10、实验中所用程序及软件 | 第26页 |
| 二、实验方法 | 第26-41页 |
| 1、目的基因的克隆 | 第26-32页 |
| 1．1 桃的MADS box基因的同源基因EST片段筛选 | 第26-27页 |
| 1．2 TE3D法提取植物总RNA | 第27页 |
| 1．3 cDNA的扩增 | 第27-28页 |
| 1．4 引物的设计 | 第28-29页 |
| 1．5 PCR扩增 | 第29页 |
| 1．6 连接反应 | 第29-30页 |
| 1．7 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 1．8 质粒DNA的转化 | 第30页 |
| 1．9 质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| 1．10 阳性克隆的PCR鉴定 | 第31页 |
| 1．11 琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 1．12 目的片段的测序 | 第32页 |
| 2、基因的序列分析与表达分析 | 第32-34页 |
| 2．1 全长cDNA编码蛋白质序列分析 | 第32-33页 |
| 2．2 基因的表达分析 | 第33-34页 |
| 2．2．1 引物的设计 | 第33页 |
| 2．2．2 RT-PCR分析 | 第33-34页 |
| 3、载体的构建 | 第34-36页 |
| 3．1 pBI121与含目的基因的质粒的限制性内切酶消化 | 第34页 |
| 3．2 目的DNA片段的回收 | 第34-35页 |
| 3．3 pBI12的去磷酸化 | 第35-36页 |
| 3．4 载体与目的DNA片段的连接 | 第36页 |
| 4、农杆菌GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| 4．1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 4．2 农杆菌GV3101感受态细胞转化 | 第37页 |
| 4．3 农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第37页 |
| 5、农杆菌介导的拟南芥转化(浸渍法) | 第37-38页 |
| 5．1 植物材料及处理 | 第37-38页 |
| 5．2 农杆菌的准备 | 第38页 |
| 5．3 转化 | 第38页 |
| 5．4 拟南芥阳性苗的筛选 | 第38页 |
| 6、DNA的提取与纯化 | 第38-41页 |
| 6．1 CTAB法提取植物基因组DNA | 第38-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-55页 |
| 一、目的基因的克隆 | 第41-42页 |
| 1、李属主要EST数据的整合和MADS box同源物的筛选。 | 第41页 |
| 2、基因的克隆 | 第41-42页 |
| 二、基因的序列分析与表达分析 | 第42-48页 |
| 1、基固序列分析 | 第42页 |
| 2、PpMADS4和PpMADS6蛋白的同源性比对和蛋白结构分析 | 第42-45页 |
| 3、PpMADS4和PpMADS6蛋白的系统进化分析 | 第45-46页 |
| 4、PpMADS4与PpMADS6基因的RT-PCR分析 | 第46-48页 |
| 三、表达载体的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 四、农杆菌介导的拟南芥转化及鉴定(COLUMBIA生态型) | 第49-52页 |
| 1、抗性株的筛选 | 第49-51页 |
| 2 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 五、转基因拟南芥的表型观察 | 第52-54页 |
| 六、农杆菌介导的LANDSBERG生态型拟南芥转化 | 第54-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-59页 |
| 1、李属EST数据分析 | 第55页 |
| 2、PpMADS6蛋白的功能 | 第55-56页 |
| 3、PpMADS4蛋白的功能 | 第56-57页 |
| 4、进一步研究工作 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69页 |
