| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| ·牛结核病的概况 | 第12-19页 |
| ·牛结核病病原学 | 第12-13页 |
| ·牛结核病的临床症状 | 第13页 |
| ·流行病学及危害 | 第13-15页 |
| ·牛结核病的发病机理 | 第15页 |
| ·抵抗牛分枝杆菌感染的免疫机理 | 第15-16页 |
| ·牛分枝杆菌作为疫苗的研究 | 第16-17页 |
| ·非结核分枝杆菌的概况 | 第17-18页 |
| ·Ag85b 概述 | 第18-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 五种分枝杆菌 AG85B 蛋白的表达和纯化 | 第20-30页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌种、载体和宿主 | 第20页 |
| ·主要试剂与药品 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·五种分枝杆菌 AG85B 基因的扩增和克隆 | 第21-24页 |
| ·分枝杆菌基因组的提取 | 第21页 |
| ·五种分枝杆菌 Ag85b 基因的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的鉴定及纯化 | 第22页 |
| ·制备带粘性末端 pET-28a 和 Ag85b 基因 | 第22-23页 |
| ·氯化钙制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·筛选阳性克隆及测序 | 第23-24页 |
| ·AG85B 蛋白诱导表达、纯化及鉴定 | 第24-25页 |
| ·Ag85b 蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组蛋白的大量表达及纯化 | 第24-25页 |
| ·包涵体的复性 | 第25页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第25页 |
| ·抗五种分枝杆菌 Ag85b 多克隆抗体的制备 | 第25页 |
| ·Western-blot 鉴定 rAg85b 蛋白 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·五种 Ag85b 基因的 PCR 扩增结果 | 第25-26页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第27页 |
| ·重组蛋白的组氨酸标签鉴定 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 五种分枝杆菌 AG85B 真核表达载体的构建及五种 RAG85B 蛋白的免疫交叉反应检测 | 第30-44页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·载体、菌种、细胞和实验动物 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第31-32页 |
| ·重组质粒在 293T 细胞中的瞬时表达 | 第32页 |
| ·间接免疫荧光的检测 | 第32页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第32页 |
| ·动物分组及重组质粒的多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| ·制备的豚鼠抗血清中大肠杆菌抗体的吸附 | 第33页 |
| ·间接 ELISA 测定交叉反应 | 第33页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第33页 |
| ·淋巴细胞 IFN-γ诱生水平的测定 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒在 293T 细胞中的表达 | 第35-36页 |
| ·间接 ELISA 测定 Ag85b 蛋白的血清学交叉反应结果 | 第36-38页 |
| ·豚鼠脾淋巴细胞增殖实验的测定 | 第38-40页 |
| ·免疫豚鼠脾淋巴细胞 IFN-γ水平的测定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
