| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 1 引言 | 第17-28页 |
| ·低温对喜温植物光合作用的影响 | 第17-19页 |
| ·低温对膜的影响 | 第19-22页 |
| ·膜脂不饱和度与植物抗寒性的关系 | 第22-23页 |
| ·不饱和脂肪酸的生物合成 | 第23-25页 |
| ·膜脂不饱和度与植物抗寒性关系的分子生物学研究进展 | 第25-27页 |
| ·本文的研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-50页 |
| ·试验材料与处理 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·材料处理 | 第28页 |
| ·甜椒的处理 | 第28页 |
| ·烟草的处理 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28-29页 |
| ·酶及生化试剂 | 第29页 |
| ·PCR 引物 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-47页 |
| ·利用 TRIZOL 试剂盒提取 RNA | 第29-31页 |
| ·RNA 反转录 | 第31-32页 |
| ·甜椒甘油-3-磷酸酰基转移酶基因全长的克隆 | 第32-36页 |
| ·中间片段的获得 | 第32-33页 |
| ·3’RACE获得3’端序列 | 第33页 |
| ·5’RACE 获得5’端序列 | 第33-35页 |
| ·GPAT 基因全长的克隆 | 第35-36页 |
| ·甜椒 GPAT 基因的克隆及测序 | 第36-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·连接 | 第36-37页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第37页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第37-38页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·序列测定 | 第39页 |
| ·Northern 杂交 | 第39-41页 |
| ·RNA 提取及电泳 | 第39页 |
| ·转膜及烘膜 | 第39-40页 |
| ·探针合成 | 第40页 |
| ·预杂交、杂交及放射自显影 | 第40-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·碱法大量提取质粒 DNA | 第41-42页 |
| ·载体构建 | 第42-43页 |
| ·电泳目的基因片段的回收 | 第43-44页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备及转化 | 第44-46页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 检测 | 第46-47页 |
| ·CTAB 法微量法提取基因组 DNA | 第46页 |
| ·转基因植株的 PCR 筛选 | 第46-47页 |
| ·转基因烟草生理指标的测定 | 第47-50页 |
| ·转基因烟草叶片膜脂含量的测定方法 | 第47-49页 |
| ·光合气体交换参数的测定 | 第49页 |
| ·荧光参数测定 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-73页 |
| ·甜椒 GPAT 基因的克隆 | 第50-54页 |
| ·甜椒叶片 RNA 的提取及反转录 | 第50页 |
| ·基因中间片段的克隆 | 第50-51页 |
| ·GPAT 基因3'端的克隆 | 第51-52页 |
| ·GPAT 基因5'端的克隆 | 第52页 |
| ·GPAT 基因全长的克隆 | 第52-54页 |
| ·基因序列同源性分析 | 第54-58页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第54-55页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第55-58页 |
| ·CaGPAT氨基酸序列的系统树分析 | 第58页 |
| ·甜椒 GPAT 基因表达特性分析 | 第58-60页 |
| ·甜椒 GPAT 基因在不同器官中表达特性 | 第58-59页 |
| ·低温和高温处理不同时间下甜椒 GPAT 基因的表达特性 | 第59页 |
| ·不同温度处理下甜椒 GPAT 基因的表达特性 | 第59-60页 |
| ·CaGPAT 基因转化烟草 | 第60-73页 |
| ·正义表达载体 PBI-GPATP 和反义表达载体 PBI-GPATN 的构建 | 第60-62页 |
| ·构建正向表达载体时的 PCR 检测 | 第62-64页 |
| ·对克隆载体的检测 | 第62-63页 |
| ·对正义表达载体的检测 | 第63-64页 |
| ·构建反义表达载体时的 PCR 检测 | 第64-65页 |
| ·对克隆载体的检测 | 第64页 |
| ·对表达载体的检测 | 第64-65页 |
| ·甜椒 GPAT 基因转化烟草及转基因植株的分子检测 | 第65-66页 |
| ·转基因烟草植株生理功能分析 | 第66-73页 |
| ·转基因烟草类囊体膜脂的变化 | 第66-68页 |
| ·野生型和转基因烟草光合速率对低温的响应 | 第68-70页 |
| ·低温下野生型和转基因烟草荧光参数的变化 | 第70-71页 |
| ·高温胁迫对野生型及转基因烟草光合速率的影响 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-80页 |
| ·甜椒 GPAT 基因及其同源基因之间的序列分析 | 第74-75页 |
| ·甜椒 GPAT 基因表达特性分析 | 第75页 |
| ·转基因烟草生理功能分析 | 第75-78页 |
| ·转基因烟草叶片中膜脂脂肪酸组成发生改变 | 第75-77页 |
| ·转 CaGPAT 降低了烟草的抗冷性而提高了其耐高温能力 | 第77页 |
| ·PG 中不饱和脂肪酸对烟草光合机构的保护作用 | 第77-78页 |
| ·进一步研究的设想 | 第78-80页 |
| 5 主要结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-94页 |
| 附录1 | 第94-95页 |
| 附录2 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
