| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 肝癌概况 | 第10-12页 |
| 1.2 APA简介 | 第12-15页 |
| 1.3 APA与肿瘤的发生 | 第15-18页 |
| 第二章 CPSF6在肝癌中表达上调 | 第18-30页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料与方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 临床样本组织中IHC检测CPSF6蛋白水平 | 第18-19页 |
| 2.2.2 临床样本组织中总RNA的抽提 | 第19-20页 |
| 2.2.3 RT-PCR与quantitive Real-time PCR(qRT-PCR) | 第20-21页 |
| 2.2.4 免疫印迹(Western Blot)检测肝癌细胞系中CPSF6蛋白表达 | 第21-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 CPSF6在肝癌临床样本中表达上调 | 第24-26页 |
| 2.3.2 CPSF6在肝癌细胞系中表达上调 | 第26-27页 |
| 2.3.3 CPSF6表达与肝癌患者预后的关系 | 第27页 |
| 2.4 本章小结 | 第27-30页 |
| 第三章 过表达CPSF6促进肝癌的增殖和转移能力 | 第30-52页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.1.1 肿瘤的增殖及转移简介 | 第30页 |
| 3.1.2 肿瘤增殖的常用体外模型 | 第30-31页 |
| 3.1.3 肿瘤转移的常用体外模型 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-45页 |
| 3.2.1 构建CPSF6基因过表达重组质粒 | 第32-37页 |
| 3.2.2 构建CPSF6基因敲低表达质粒 | 第37-38页 |
| 3.2.3 细胞的培养及转染 | 第38-41页 |
| 3.2.4 稳定细胞系的筛选 | 第41页 |
| 3.2.5 Western Blot检测CPSF6蛋白表达水平 | 第41页 |
| 3.2.6 细胞计数(Cell Counting Assay) | 第41-42页 |
| 3.2.7 细胞活力检测(MTT Assay) | 第42页 |
| 3.2.8 克隆形成能力检测((Clone Formation Assay) | 第42-43页 |
| 3.2.9 Transwell迁移和侵袭实验 | 第43-44页 |
| 3.2.10 细胞划痕愈合实验(Wound Healing Assay) | 第44页 |
| 3.2.11 肝癌细胞裸鼠背部皮下注射实验 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.3.1 过表达CPSF6促进肝癌细胞的增殖 | 第45-46页 |
| 3.3.2 过表达CPSF6促进肝癌细胞迁移和侵袭 | 第46-47页 |
| 3.3.3 敲低CPSF6抑制肝癌细胞增殖 | 第47-48页 |
| 3.3.4 敲低CPSF6抑制肝癌细胞迁移和侵袭 | 第48-50页 |
| 3.3.5 过表达CPSF6在体内促进肝癌细胞的增殖 | 第50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 CPSF6下游作用靶点的研究 | 第52-62页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 cDNA快速扩增3'末端(3'RACE)实验 | 第52-53页 |
| 4.2.2 quantitive Real-time PCR(qRT -PCR) | 第53-54页 |
| 4.2.3 双荧光报告实验 | 第54-55页 |
| 4.2.4 Western blot检测HCCR2蛋白的表达水平 | 第55页 |
| 4.2.5 体外敲低HCCR2细胞系建立 | 第55-56页 |
| 4.2.6 体外瞬转HCCR2细胞功能检测 | 第56页 |
| 4.2.7 网补实验检测细胞功能实验 | 第56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-61页 |
| 4.3.1 选择CPSF6下游靶点基因 | 第56-57页 |
| 4.3.2 CPSF6促进HCCR2的具有缩短3'UTR的转录本高表达 | 第57-59页 |
| 4.3.3 SMMC-7721细胞系中敲低HCCR2抑制肝癌细胞增殖和转移 | 第59-60页 |
| 4.3.4 CPSF6通过HCCR2来调节肝癌细胞的增殖和转移 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 CPSF6上游调控机制研究 | 第62-68页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 材料和方法 | 第62-63页 |
| 5.2.1 组织中micro-RNA抽取及RT-PCR和qRT-PCR | 第62-63页 |
| 5.2.2 microRNA mimics和ASO的转染 | 第63页 |
| 5.2.3 qPCR检测CPSF6基因的mRNA表达水平 | 第63页 |
| 5.2.4 Western blot检测CPSF6蛋白的表达水平 | 第63页 |
| 5.2.5 双荧光报告实验 | 第63页 |
| 5.3 实验结果 | 第63-66页 |
| 5.3.1 靶点于CPSF6基因的miRNA的筛选 | 第63-65页 |
| 5.3.2 let-7a/c和miR-26a靶标CPSF6基因3'UTR的鉴定 | 第65-66页 |
| 5.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第68-70页 |
| 6.1 实验结果总结 | 第68-69页 |
| 6.2 未来工作的展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
