| 第一章 引言 | 第1-20页 |
| 1 超氧化物歧化酶与氧自由基清除系统 | 第10-15页 |
| ·生物体内氧自由基和氧自由基清除系统 | 第10-11页 |
| ·超氧化物歧化酶的研究 | 第11-15页 |
| 2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第15-19页 |
| ·生物学特点 | 第15-16页 |
| ·表达载体 | 第16页 |
| ·外源蛋白的分泌 | 第16-18页 |
| ·外源基因的诱导表达及发酵 | 第18-19页 |
| 3 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)Mn-sod2基因在毕赤酵母中的胞内表达 | 第20-39页 |
| 1 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-25页 |
| ·方法 | 第25-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·胞内表达载体pPICZA-sodM18的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒pPICZA-sodM18的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·基因工程菌的重组 | 第33-34页 |
| ·Mn-sod2基因在酵母中的整合和PCR鉴定 | 第34-36页 |
| ·重组酵母菌株表型筛选 | 第36页 |
| ·Mn-sod2基因在毕赤酵母中的胞内表达及酶活鉴定 | 第36-38页 |
| ·诱导时间对酶活性的影响 | 第38页 |
| ·重组菌株酶活力测定 | 第38-39页 |
| 第三章 Mn-sod2、CuZn-sod基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·分泌表达载体pPICZαA-sodM18、pPICZαA-sodC的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒pPICZαA-sodM18、pPICZαA-sodC的酶切鉴定 | 第42-44页 |
| ·基因工程菌的重组 | 第44页 |
| ·重组菌株的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·Mn-sod2基因、CuZn-sod基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第45-48页 |
| ·表达产物的酶活性测定 | 第48-49页 |
| 第四章 讨论 | 第49-53页 |
| 1 构建胞内表达载体pPICZA-sodM18 | 第49页 |
| 2 重组整合质粒的转化 | 第49-50页 |
| 3 重组质粒与宿主基因组的同源重组 | 第50页 |
| 4 重组酵母菌株的诱导表达 | 第50-51页 |
| 5 影响外源基因高效表达的其它因素 | 第51-53页 |
| ·外源基因自身对高效表达的影响 | 第51页 |
| ·蛋白酶降解的影响 | 第51页 |
| ·诱导条件的影响 | 第51-53页 |
| 第五章 结论与建议 | 第53-54页 |
| 1 结论 | 第53页 |
| 2 建议 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
