植酸酶基因线性化片段转化玉米的研究
| 0 前言 | 第1-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-32页 |
| ·具有生物安全性的转基因方法 | 第9-15页 |
| ·转基因作物的研究与产业化概况 | 第9-10页 |
| ·转基因作物的基本特征与潜在风险 | 第10-15页 |
| ·转基因作物的特征 | 第10-11页 |
| ·转基因作物的潜在风险 | 第11-15页 |
| ·具有生物安全性的转基因策略 | 第15页 |
| ·转基因玉米的研究状况 | 第15-22页 |
| ·玉米的种植情况 | 第15-16页 |
| ·转基因玉米的研究情况 | 第16-22页 |
| ·玉米转化的受体系统 | 第17-19页 |
| ·转化方法 | 第19-21页 |
| ·转基因玉米的筛选方法 | 第21页 |
| ·外源基因在转基因后代中的遗传表达及稳定性 | 第21-22页 |
| ·植酸酶的研究概况 | 第22-27页 |
| ·植酸酶的性质与应用 | 第22-24页 |
| ·植酸酶基因的结构与功能 | 第24-25页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第25-27页 |
| ·本论文的研究目的及意义 | 第27-32页 |
| 2 植酸酶基因转化玉米 | 第32-46页 |
| ·实验材料、药品与仪器 | 第32-33页 |
| ·实验材料与药品 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·基因转化元件的获得 | 第33-39页 |
| ·植酸酶基因植物表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·提取质粒pBI121/phyAⅡ | 第34-36页 |
| ·LB培养基的配制 | 第34-35页 |
| ·JM109/phyAⅡ的培养与菌种保存 | 第35页 |
| ·提取质粒用试剂 | 第35-36页 |
| ·质粒提取方法 | 第36页 |
| ·基因转化元件的获得 | 第36-37页 |
| ·基因转化元件的琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定 | 第37-39页 |
| ·溶液配制 | 第37-38页 |
| ·琼脂糖凝胶制备 | 第38页 |
| ·电泳检测和摄影 | 第38页 |
| ·回收及测序 | 第38-39页 |
| ·转化方法 | 第39页 |
| ·实验结果与分析 | 第39-42页 |
| ·基因转化元件的构建 | 第39-42页 |
| ·转化材料 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-46页 |
| ·关于线性转化元件 | 第42-44页 |
| ·关于花粉管通道法 | 第44-46页 |
| 3 转化玉米材料的检测 | 第46-65页 |
| ·实验材料与药品 | 第46-47页 |
| ·转化玉米植株检测的实验方法 | 第47-52页 |
| ·CTAB法提取玉米叶片总DNA | 第47页 |
| ·PCR检测植酸酶基因 | 第47-48页 |
| ·PCR检测gus基因 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测gus基因 | 第49-51页 |
| ·RNA提取 | 第49-50页 |
| ·反转录反应 | 第50页 |
| ·目的基因phyA的PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·GUS组织化学染色鉴定 | 第51页 |
| ·植酸酶蛋白酶活测定 | 第51-52页 |
| ·植酸酶活性单位(U)定义 | 第51页 |
| ·磷标准曲线的绘制 | 第51-52页 |
| ·转基因玉米材料的植酸酶活性检测 | 第52页 |
| ·实验结果与分析 | 第52-60页 |
| ·CTAB法提取的玉米叶片基因组DNA | 第52-53页 |
| ·T1代转化材料检测结果 | 第53-54页 |
| ·T1代转化材料的植酸酶基因PCR检测结果 | 第53-54页 |
| ·T1代转化材料gus基因PCR检测结果 | 第54页 |
| ·T2代转化材料检测结果 | 第54-60页 |
| ·T2代转化材料PCR检测结果 | 第54-56页 |
| ·T2代转化材料PCR扩增产物序列测定 | 第56-57页 |
| ·T2代转化材料RT-PCR检测结果 | 第57-59页 |
| ·T2代转化材料GUS染色 | 第59页 |
| ·T2代转化材料植酸酶酶活检测 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-65页 |
| ·花粉管通道法转基因的分子生物学证据 | 第60-61页 |
| ·转基因玉米的遗传特性 | 第61-62页 |
| ·转基因的表达特性 | 第62-65页 |
| 4 结论与展望 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-69页 |
