| 第一章 文献综述 | 第1-26页 |
| 一、 前言 | 第9页 |
| 二、 植物基因工程简介 | 第9-11页 |
| 1 植物基因工程及其研究进展 | 第9-10页 |
| 2 基因工程在培育农作物新品种方面的技术优势和开发前景 | 第10页 |
| 3 在研究应用中，转化植物基因主要类型 | 第10-11页 |
| 三、 ipt基因及其功能、研究进展与应用 | 第11-15页 |
| 1 细胞分裂素(Cytokinins)及相关的生物合成基因 | 第11-12页 |
| 2 ipt基因(isopentenyl transferase gene, tmr基因) | 第12页 |
| 3 ipt基因转化植物所使用的启动子 | 第12-13页 |
| 4 ipt基因表达的生物学效应 | 第13-14页 |
| 5 利用ipt基因的现状 | 第14-15页 |
| 四、 植物遗传转化 | 第15-23页 |
| 1 植物遗传转化方法 | 第15-17页 |
| 2 农杆菌Ti质粒介导的植物遗传转化 | 第17-21页 |
| 3 Ti质粒衍生的载体系统 | 第21-23页 |
| 五、 影响农杆菌转化的因素 | 第23-25页 |
| 1 Vir基因诱导因子 | 第23-24页 |
| 2 细胞的生理状态和分化程度--植物细胞的感受态 | 第24页 |
| 3 细菌菌株和载体 | 第24-25页 |
| 六、 ELISA检测 | 第25页 |
| 七、 本工作的目的 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-50页 |
| 一、 ipt基因植物表达载体的建立 | 第26-40页 |
| 1 试验材料 | 第26-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·酶及相关试剂盒 | 第26页 |
| ·菌株培养基及培养条件 | 第26-28页 |
| ·常用溶液、缓冲液 | 第28-29页 |
| ·常用的抗生素及其浓度 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| 2 试验方法 | 第29-40页 |
| ·水稻总DNA的小量提取 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第30-33页 |
| ·外源ipt基因与启动子的PCR扩增 | 第33-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·DNA的回收 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第37-38页 |
| ·DNA连接 | 第38页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第38-39页 |
| ·重组质粒导入农杆菌 | 第39-40页 |
| 二 烟草植株再生体系的建立 | 第40-43页 |
| 1 试验材料 | 第40-42页 |
| 2 试验方法 | 第42-43页 |
| ·无菌苗的获得 | 第42页 |
| ·烟草幼芽的诱导与继代 | 第42页 |
| ·植株的再生 | 第42页 |
| ·驯化移栽 | 第42-43页 |
| 三、 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第43-44页 |
| 1 试验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43页 |
| ·菌株的活化 | 第43页 |
| 3 遗传转化 | 第43-44页 |
| ·遗传转化步骤 | 第43页 |
| ·植株再生 | 第43-44页 |
| 四、 转gus基因株的gus染色检测 | 第44页 |
| 1 试验材料 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44页 |
| 五、 转ipt基因植株的PCR检测及测序分析 | 第44-47页 |
| 1 试验材料 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-47页 |
| ·转基因烟草总DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·PCR检测和测序分析 | 第45-47页 |
| 六、 植物细胞分裂素的ELISA检测 | 第47-50页 |
| 1 试验材料 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-50页 |
| ·植物细胞分裂素的提取 | 第47-48页 |
| ·样品的ELISA测定 | 第48-50页 |
| 第三章 结果与分析 | 第50-70页 |
| 一、 物表达载体的建立 | 第50-61页 |
| 1 ipt基因的克隆与序列分析 | 第50-52页 |
| 2 水稻种子特异表达启动子的克隆 | 第52-57页 |
| 3 植物表达载体的建立 | 第57-61页 |
| ·gus基因植物表达载体的建立 | 第57-58页 |
| ·ipt基因植物表达载体的建立 | 第58-61页 |
| 二、 烟草叶盘的基因转化和植株的形成 | 第61-62页 |
| 1 烟草遗传转化 | 第61页 |
| 2 植株的形成 | 第61-62页 |
| 三、 转基因烟草种子的gus活性染色 | 第62-63页 |
| 四、 转基因植株的分子检测 | 第63-67页 |
| 1 转基因植株的PCR检测 | 第63-64页 |
| 2 转基因植株目的基因序列分析 | 第64-67页 |
| 五、 转ipt基因植株的表型分析 | 第67-68页 |
| 六、 种子中激素含量的ELISA检测及其重量分析 | 第68-70页 |
| 1 ELISA检测iPAs的含量 | 第68页 |
| 2 种子重量分析 | 第68-70页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第70-73页 |
| 一、 关于目的基因的鉴定与表达 | 第70页 |
| 二、 水稻种子特异表达的启动子驱动ipt基因的表达对转基因烟草的影响 | 第70-71页 |
| 1 对表型的影响 | 第70-71页 |
| 2 对激素含量的影响 | 第71页 |
| 3 对种子重量的影响 | 第71页 |
| 三、 影响转化效率的因素 | 第71-72页 |
| 四、 用ipt基因进行遗传育种研究 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
