| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第8-20页 |
| ·前言 | 第8页 |
| ·候选基因法 | 第8-9页 |
| ·胰岛素的生理功能与胰岛素信号转导通路 | 第9页 |
| ·胰岛素受体底物家族概述 | 第9-12页 |
| ·IRS蛋白的结构与特性 | 第9-11页 |
| ·IRS的功能 | 第11-12页 |
| ·IRS-1简介 | 第12-15页 |
| ·IRS-1的功能 | 第13-14页 |
| ·IRS-1基因上的SNPs与二型糖尿病的关系 | 第14-15页 |
| ·单核苷酸多态概述 | 第15-17页 |
| ·SNP作为遗传标记的优势: | 第16页 |
| ·SNP的检测技术 | 第16-17页 |
| ·单链构象多态性概述 | 第17-18页 |
| ·检测猪IRS-1 SNPs的意义 | 第18-19页 |
| ·以猪作为研究糖尿病的动物模型 | 第19-20页 |
| 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-33页 |
| 1 试验材料 | 第21-23页 |
| ·样品 | 第21页 |
| ·组织样品: | 第21页 |
| ·DNA样品: | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第22页 |
| ·互联网数据库资源与在线分析网址 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-33页 |
| ·猪IRS-1基因的同源比较克隆 | 第23-28页 |
| ·组织样的取材 | 第23页 |
| ·总RNA的提取、检测与DNase-Ⅰ处理 | 第23-24页 |
| ·反转录总RNA，合成cDNA第一链 | 第24页 |
| ·RT-PCR的引物设计 | 第24-25页 |
| ·猪IRS-1基因的分段扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收与测序 | 第26-28页 |
| ·DNA序列的拼接 | 第28页 |
| ·猪IRS-1基因的染色体精细定位 | 第28-29页 |
| ·定位引物的设计 | 第28页 |
| ·辐射杂种板的PCR反应与电泳检测 | 第28-29页 |
| ·PCR分型结果的提交与分析 | 第29页 |
| ·猪IRS-1基因单核苷酸多态的SSCP检测 | 第29-33页 |
| ·SNP拟扫描片段的选取 | 第29页 |
| ·SSCP的引物设计 | 第29-30页 |
| ·PCR反应体系与反应参数: | 第30页 |
| ·SNP的SSCP电泳检测 | 第30-33页 |
| 试验结果 | 第33-40页 |
| 1 总RNA的提取与质量检测结果 | 第33页 |
| 2 猪IRS-1基因编码区序列的克隆结果 | 第33-34页 |
| 3 猪IRS-1基因的染色体定位结果 | 第34-37页 |
| 4 SNP检测结果 | 第37-40页 |
| ·用SSCP筛选差异个体 | 第37页 |
| ·PCR产物直接测序，寻找SSCP条带差异个体的变异位点 | 第37-38页 |
| ·等位基因频率计算与群体差异的显著性检验 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-48页 |
| 1 基因的同源比较克隆 | 第40-41页 |
| 2 引物设计与PCR反应优化 | 第41-44页 |
| 3 猪IRS-1的氨基酸推导序列的分析 | 第44-45页 |
| 4 猪IRS-1基因的染色体定位问题 | 第45页 |
| 5 SNP标记与微卫星标记的比较 | 第45-46页 |
| 6 SSCP电泳条带分型问题 | 第46-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 附表 | 第49-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |