| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 第一部分 Lipocalin型前列腺素D合成酶真核表达载体的构建 | 第13-21页 |
| 1 材料和方法 | 第13-17页 |
| ·实验材料、仪器和试剂 | 第13-14页 |
| ·引物设计与合成 | 第14页 |
| ·测序载体的构建及鉴定 | 第14-15页 |
| ·PCR扩增L-PGDS基因片段 | 第14-15页 |
| ·测序载体pGEM-T/htL-PGDS的构建 | 第15页 |
| ·鉴定和序列分析 | 第15页 |
| ·pPIC9/htL-PGDS重组表达质粒的构建 | 第15页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第15-17页 |
| 2 结果 | 第17-19页 |
| ·L-PGDS的扩增结果 | 第17页 |
| ·测序载体的构建和序列分析 | 第17-19页 |
| ·L-PGDS真核表达载体的构建 | 第19页 |
| 3 讨论 | 第19-21页 |
| 第二部分 L-PGDS酵母表达菌株的建立 | 第21-29页 |
| 1 材料和方法 | 第21-26页 |
| ·主要实验材料、仪器和试剂 | 第21-22页 |
| ·主要试剂配制 | 第22-23页 |
| ·贮存液的配制 | 第22页 |
| ·培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·待转化DNA的制备 | 第23-24页 |
| ·质粒pPIC9/htL-PGDS和pPIC9的线性化 | 第23页 |
| ·乙醇沉淀回收DNA | 第23-24页 |
| ·感受态酵母细胞的制备 | 第24页 |
| ·L-PGDS基因的电转化 | 第24页 |
| ·酵母转化菌的鉴定 | 第24页 |
| ·表型的鉴定 | 第24-25页 |
| ·L-PGDS表达阳性克隆的筛选 | 第25页 |
| ·不同诱导时间重组L-PGDS的表达 | 第25页 |
| ·表达量的初步分析 | 第25-26页 |
| 2 结果 | 第26-28页 |
| ·质粒pPIC9/htL-PGDS的酵母转化 | 第26页 |
| ·表型鉴定 | 第26-27页 |
| ·表达阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| ·不同诱导时间重组L-PGDS的表达 | 第27页 |
| ·表达量的初步分析 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 第三部分 L-PGDS的大规模诱导表达、纯化和鉴定 | 第29-36页 |
| 1 材料和方法 | 第29-32页 |
| ·主要实验材料、仪器和试剂 | 第29-30页 |
| ·L-PGDS的大规模诱导表达 | 第30页 |
| ·重组蛋白质的纯化 | 第30-31页 |
| ·硫酸氨沉淀法浓缩酵母培养上清 | 第30页 |
| ·镍离子亲和层析 | 第30-31页 |
| ·L-PGDS糖链的水解 | 第31页 |
| ·纯化蛋白的生物学活性检测 | 第31页 |
| ·重组L-PGDS的免疫印迹 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-34页 |
| ·L-PGDS的表达、纯化 | 第32页 |
| ·重组L-PGDS的糖基化分析 | 第32-33页 |
| ·重组L-PGDS的生物学活性 | 第33-34页 |
| ·重组L-PGDS的Western印迹 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第四部分 分泌L-PGDS单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定 | 第36-44页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·主要实验材料、仪器和方法 | 第36-37页 |
| ·免疫脾细胞制备 | 第37页 |
| ·免疫BALB／c小鼠 | 第37页 |
| ·制备免疫脾细胞悬液 | 第37页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第37页 |
| ·细胞融合 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞观察及换液 | 第38页 |
| ·分泌L-PGDS McAb阳性克隆的检测 | 第38页 |
| ·阳性克隆有限稀释 | 第38-39页 |
| ·腹水型单克隆抗体的制备 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体亚类测定 | 第39页 |
| ·效价测定 | 第39页 |
| ·特异性鉴定 | 第39-40页 |
| ·L-PGDS McAb与精浆中L-PGDS的蛋白印迹 | 第39-40页 |
| ·L-PGDS McAb与重组L-PGDS的蛋白印迹 | 第40页 |
| ·免疫阻断试验 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-42页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚类测定结果 | 第40-41页 |
| ·L-PGDS McAb的效价测定结果 | 第41页 |
| ·特异性鉴定 | 第41-42页 |
| ·L-PGDS McAb与精浆中L-PGDS的蛋白印迹 | 第41-42页 |
| ·L-PGDS McAb与重组L-PGDS的蛋白印迹 | 第42页 |
| ·免疫阻断试验结果 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 研究生期间主要学术成果 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 综述及参考文献 | 第51-58页 |
