反义RNA抑制禽流感病毒PB1基因的研究
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-11页 |
| 文献综述 | 第11-39页 |
| 材料与方法 | 第39-55页 |
| 1 试验材料 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-55页 |
| 2．1 质粒的提取与纯化 | 第41-42页 |
| 2．2 反义基因的选择设计与引物合成 | 第42-43页 |
| 2．3 反义RNA表达质粒的构建 | 第43-45页 |
| 2．4 反义RNA表达质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| 2．5 脂质体介导法转染反义RNA表达质粒 | 第46-47页 |
| 2．6 G418抗性（G418R）细胞的筛选 | 第47页 |
| 2．7 G418R细胞的克隆 | 第47-48页 |
| 2．8 G418R细胞的扩增 | 第48页 |
| 2．9 假病毒原液的制备和浓缩 | 第48页 |
| 2．10 假病毒粒子滴度的测定 | 第48-50页 |
| 2．11 靶细胞的感染 | 第50页 |
| 2．12 外源基因转移后的表达鉴定 | 第50-52页 |
| 2．13 反义RNA抑制率的检测 | 第52-55页 |
| 结果 | 第55-71页 |
| 1 有关质粒载体的背景与鉴定 | 第55-56页 |
| 2 反义基因的合成与克隆 | 第56页 |
| 3 PCR产物限制性酶切分析 | 第56-57页 |
| 4 反义RNA表达质粒的构建过程 | 第57-62页 |
| 5 包装细胞系PA317的转染 | 第62-63页 |
| 6 G418R细胞的克隆与扩增 | 第63页 |
| 7 假病毒粒子滴度的测定 | 第63-65页 |
| 8 外源基因转移后的表达鉴定 | 第65-66页 |
| 9 反义表达质粒对禽流感AIVH5N1的抑制作用 | 第66-71页 |
| 讨论 | 第71-79页 |
| 1 反义RNA的设计与选择 | 第71页 |
| 2 哺乳动物细胞基因转移技术 | 第71-74页 |
| 3 表达载体及反义基因的选择 | 第74页 |
| 4 G418R细胞克隆的选择 | 第74-75页 |
| 5 假病毒粒子滴度的测定 | 第75-76页 |
| 6 反义RNA对病毒的抑制效应 | 第76-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
