致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
1. 文献综述 | 第10-16页 |
·淀粉生物合成及相关酶 | 第10-13页 |
·淀粉生物合成相关酶 | 第10-13页 |
·ADP-葡萄糖焦磷酸化酶 | 第11-12页 |
·淀粉合成酶 | 第12-13页 |
·淀粉分支酶 | 第13页 |
·淀粉去分支酶 | 第13页 |
·小麦基因工程研究进展 | 第13-14页 |
·小麦转基因方法及其研究现状 | 第14-16页 |
·基因枪法 | 第14页 |
·农杆菌介导法 | 第14页 |
·花粉管通道法 | 第14-16页 |
2. 引言 | 第16-17页 |
3. 材料与方法 | 第17-26页 |
·实验材料 | 第17-18页 |
·植物材料和菌株 | 第17页 |
·质粒载体 | 第17页 |
·主要仪器 | 第17页 |
·PCR引物 | 第17页 |
·工具酶及试剂盒 | 第17-18页 |
·实验方法 | 第18-26页 |
·总RNA提取及质量鉴定 | 第18-19页 |
·试剂和器皿的准备 | 第18页 |
·试验准备 | 第18页 |
·总RNA提取操作步骤(Trizol法) | 第18-19页 |
·总RNA质量及浓度测定 | 第19页 |
·目的基因的克隆 | 第19-22页 |
·反转录:cDNA第一链的合成 | 第19页 |
·目的基因克隆PCR | 第19-20页 |
·PCR产物的回收和连接测序 | 第20-21页 |
·PCR产物的回收 | 第20页 |
·回收产物与T 载体的连接 | 第20-21页 |
·重组载体对大肠杆菌的转化 | 第21页 |
·阳性克隆的筛选、鉴定及序列分析 | 第21-22页 |
·重组质粒的提取 | 第21-22页 |
·重组质粒的测序及序列分析 | 第22页 |
·SSU II 在淀粉合成中的表达分析 | 第22页 |
·灌浆期SSU II 组织特异表达研究 | 第22页 |
·灌浆期豫教2 号和兰考矮早8 两小麦品种籽粒内淀粉积累速率研究 | 第22页 |
·灌浆时期SSU II表达研究 | 第22页 |
·SSU II过表达载体(pWM101SSU IIS)的构建与鉴定 | 第22-23页 |
·SSU II过表达载体(pWM101SSUIIS)的构建 | 第23页 |
·重组质粒的提取和酶切鉴定 | 第23页 |
·碱-裂解法重组质粒的提取 | 第23页 |
·重组植物表达载体质粒的PCR和酶切鉴定 | 第23页 |
·花粉管通道法遗传转化 | 第23-26页 |
·转化方法 | 第23页 |
·转基因T_0代籽粒的收获 | 第23页 |
·转基因植株T_1代的培育及PCR检测 | 第23-24页 |
·转基因植株基因组DNA的提取(SDS法) | 第23-24页 |
·转基因植株PCR检测 | 第24页 |
·T_2代转基因植株AGPase活性测定及千粒重分析 | 第24-26页 |
·T_2代转基因植株AGPase活性测定 | 第24-25页 |
·T_2代转基因植株粒重测定 | 第25-26页 |
4. 结果与分析 | 第26-39页 |
·小麦AGPase质体型小亚基基因cDNA序列的克隆 | 第26-34页 |
·RNA质量检测及第一链cDNA的获得 | 第26页 |
·SSU II的克隆及序列分析 | 第26-34页 |
·豫教2 号和Bobwhite SSU II cDNA全长的克隆 | 第26-27页 |
·SSU II的序列分析 | 第27-33页 |
·SSU II cDNA序列分析 | 第27-29页 |
·几种作物 SSU II 转移肽同源性比较 | 第29-31页 |
·豫教2 号中SSU II 5' 端转移肽序列的扩增 | 第31-32页 |
·所克隆的小麦SSU II序列上也具有热稳定性区域(QTCL) | 第32-33页 |
·灌浆期SSU II基因在淀粉合成中的作用分析 | 第33-34页 |
·灌浆期SSU II组织特异性表达分析 | 第33页 |
·灌浆期SSU II表达量分析 | 第33-34页 |
·SSU II基因植物表达载体的构建及酶切鉴定 | 第34-36页 |
·SSU II基因植物表达载体的构建 | 第34-36页 |
·转基因植株的获得及PCR检测 | 第36-37页 |
·花粉管通道法转化及 T_0 代籽粒的获得 | 第36页 |
·花粉管通道法遗传转化 T_1 代幼苗的分子检测 | 第36-37页 |
·T_2转基因植株SSU II基因表达量分析、AGPase活性及粒重测定 | 第37-39页 |
·T_2代转基因植株SSU II基因表达量分析 | 第37-38页 |
·T_2代转基因植株AGPase活性测定 | 第38页 |
·T_2代转基因植株籽粒千粒重测定 | 第38-39页 |
5. 小结与讨论 | 第39-40页 |
·从小麦籽粒中克隆了一个新的SSU II基因 | 第39页 |
·SSU II基因的时空表达 | 第39页 |
·SSU II基因的遗传转化 | 第39-40页 |
·过表达质体型AGPase提高小麦籽粒淀粉含量和粒重的研究 | 第40页 |
6 下一步试验 | 第40-42页 |
参考文献 | 第42-49页 |
ABSTRACT: | 第49-50页 |