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小麦AGPase质体型小亚基的克隆及其遗传转化

致谢第1-8页
摘要第8-10页
1. 文献综述第10-16页
   ·淀粉生物合成及相关酶第10-13页
     ·淀粉生物合成相关酶第10-13页
       ·ADP-葡萄糖焦磷酸化酶第11-12页
       ·淀粉合成酶第12-13页
       ·淀粉分支酶第13页
       ·淀粉去分支酶第13页
   ·小麦基因工程研究进展第13-14页
   ·小麦转基因方法及其研究现状第14-16页
     ·基因枪法第14页
     ·农杆菌介导法第14页
     ·花粉管通道法第14-16页
2. 引言第16-17页
3. 材料与方法第17-26页
   ·实验材料第17-18页
     ·植物材料和菌株第17页
     ·质粒载体第17页
     ·主要仪器第17页
     ·PCR引物第17页
     ·工具酶及试剂盒第17-18页
   ·实验方法第18-26页
     ·总RNA提取及质量鉴定第18-19页
       ·试剂和器皿的准备第18页
       ·试验准备第18页
       ·总RNA提取操作步骤(Trizol法)第18-19页
       ·总RNA质量及浓度测定第19页
     ·目的基因的克隆第19-22页
       ·反转录:cDNA第一链的合成第19页
       ·目的基因克隆PCR第19-20页
       ·PCR产物的回收和连接测序第20-21页
         ·PCR产物的回收第20页
         ·回收产物与T 载体的连接第20-21页
       ·重组载体对大肠杆菌的转化第21页
       ·阳性克隆的筛选、鉴定及序列分析第21-22页
         ·重组质粒的提取第21-22页
         ·重组质粒的测序及序列分析第22页
     ·SSU II 在淀粉合成中的表达分析第22页
       ·灌浆期SSU II 组织特异表达研究第22页
       ·灌浆期豫教2 号和兰考矮早8 两小麦品种籽粒内淀粉积累速率研究第22页
       ·灌浆时期SSU II表达研究第22页
     ·SSU II过表达载体(pWM101SSU IIS)的构建与鉴定第22-23页
       ·SSU II过表达载体(pWM101SSUIIS)的构建第23页
       ·重组质粒的提取和酶切鉴定第23页
         ·碱-裂解法重组质粒的提取第23页
         ·重组植物表达载体质粒的PCR和酶切鉴定第23页
     ·花粉管通道法遗传转化第23-26页
       ·转化方法第23页
       ·转基因T_0代籽粒的收获第23页
       ·转基因植株T_1代的培育及PCR检测第23-24页
         ·转基因植株基因组DNA的提取(SDS法)第23-24页
         ·转基因植株PCR检测第24页
       ·T_2代转基因植株AGPase活性测定及千粒重分析第24-26页
         ·T_2代转基因植株AGPase活性测定第24-25页
         ·T_2代转基因植株粒重测定第25-26页
4. 结果与分析第26-39页
   ·小麦AGPase质体型小亚基基因cDNA序列的克隆第26-34页
     ·RNA质量检测及第一链cDNA的获得第26页
     ·SSU II的克隆及序列分析第26-34页
       ·豫教2 号和Bobwhite SSU II cDNA全长的克隆第26-27页
       ·SSU II的序列分析第27-33页
         ·SSU II cDNA序列分析第27-29页
         ·几种作物 SSU II 转移肽同源性比较第29-31页
         ·豫教2 号中SSU II 5' 端转移肽序列的扩增第31-32页
         ·所克隆的小麦SSU II序列上也具有热稳定性区域(QTCL)第32-33页
       ·灌浆期SSU II基因在淀粉合成中的作用分析第33-34页
         ·灌浆期SSU II组织特异性表达分析第33页
         ·灌浆期SSU II表达量分析第33-34页
   ·SSU II基因植物表达载体的构建及酶切鉴定第34-36页
     ·SSU II基因植物表达载体的构建第34-36页
   ·转基因植株的获得及PCR检测第36-37页
     ·花粉管通道法转化及 T_0 代籽粒的获得第36页
     ·花粉管通道法遗传转化 T_1 代幼苗的分子检测第36-37页
   ·T_2转基因植株SSU II基因表达量分析、AGPase活性及粒重测定第37-39页
     ·T_2代转基因植株SSU II基因表达量分析第37-38页
     ·T_2代转基因植株AGPase活性测定第38页
     ·T_2代转基因植株籽粒千粒重测定第38-39页
5. 小结与讨论第39-40页
   ·从小麦籽粒中克隆了一个新的SSU II基因第39页
   ·SSU II基因的时空表达第39页
   ·SSU II基因的遗传转化第39-40页
   ·过表达质体型AGPase提高小麦籽粒淀粉含量和粒重的研究第40页
6 下一步试验第40-42页
参考文献第42-49页
ABSTRACT:第49-50页

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