| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·逆境胁迫对植物的影响 | 第10-13页 |
| ·干旱胁迫对植物生长及生理生化过程的影响 | 第10-12页 |
| ·盐胁迫对植物生长及生理生化过程的影响 | 第12-13页 |
| ·植物的抗旱、耐盐机制 | 第13-14页 |
| ·细胞内的渗透调节机制 | 第13-14页 |
| ·细胞膜的渗透调节机制 | 第14页 |
| ·转录因子的研究概况 | 第14-17页 |
| ·转录因子的结构 | 第15页 |
| ·转录因子的表达及活性调控 | 第15-16页 |
| ·转录因子在逆境抗性基因工程中的应用 | 第16页 |
| ·LbGRP基因研究进展 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 实时荧光定量PCR技术研究LbGRP基因的表达 | 第18-25页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-19页 |
| ·CTAB法提取植物总RNA及消化 | 第18页 |
| ·mRNA反转录为cDNA | 第18页 |
| ·内标基因的确定和引物的设计 | 第18-19页 |
| ·读板温度的确定 | 第19页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第19页 |
| ·数据处理 | 第19页 |
| ·结果与分析 | 第19-23页 |
| ·NaCl胁迫下的LbGRP表达 | 第19-20页 |
| ·KCl胁迫下的LbGRP表达 | 第20-21页 |
| ·冷胁迫下的LbGRP表达 | 第21页 |
| ·Na_2CO_3胁迫下的LbGRP表达 | 第21-22页 |
| ·NaHCO_3胁迫下的LbGRP表达 | 第22页 |
| ·PEG胁迫下的LbGRP表达 | 第22-23页 |
| ·本章小结 | 第23-25页 |
| 3 LbGRP基因酵母表达载体的构建 | 第25-41页 |
| ·材料与条件 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·基因 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-33页 |
| ·基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·酵母表达载体pYES2-LbGRP的构建 | 第27-31页 |
| ·重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)的胁迫处理 | 第31-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·pYES2的双酶切 | 第33页 |
| ·目的基因的PCR扩增及酶切 | 第33-34页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌重组质粒pYES2-LbGRP的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pYES-LbGRP酵母转化 | 第35页 |
| ·酵母重组质粒pYES2-LbGRP的PCR检测 | 第35-36页 |
| ·重组酵母Northern杂交 | 第36-37页 |
| ·酵母压力实验结果 | 第37-39页 |
| ·INVSc1(pYES2-LbGRP)NaCl和KCl处理 | 第37-38页 |
| ·INVSc1(pYES2-LbGRP)的Na_2CO_3胁迫处理 | 第38页 |
| ·INVSc1(pYES2-LbGRP)的NaHCO_3胁迫处理 | 第38页 |
| ·INVSc1(pYES2-LbGRP)的干旱胁迫处理 | 第38-39页 |
| ·INVSc1(pYES2-LbGRP)的-20℃低温胁迫处理 | 第39页 |
| ·本章小结 | 第39-41页 |
| 4 基因芯片技术研究转基因酵母的表达 | 第41-48页 |
| ·材料和方法 | 第41-42页 |
| ·样品的收集 | 第41页 |
| ·总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·转录谱分析 | 第42-43页 |
| ·基因芯片 | 第42页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记 | 第42页 |
| ·杂交与清洗 | 第42页 |
| ·扫描及数据处理 | 第42-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-47页 |
| ·RNA检测 | 第43页 |
| ·芯片杂交的伪色图 | 第43-44页 |
| ·芯片杂交的散点图 | 第44-45页 |
| ·基因的上调和下调表达 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 5 二色补血草LbGRP基因在烟草中的功能分析 | 第48-73页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·主要试剂 | 第48-50页 |
| ·方法 | 第50-58页 |
| ·pROKⅡ-LbGRP植物表达载体的构建 | 第50页 |
| ·农杆菌感受态的制备及电击转化 | 第50-51页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第51页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第51-52页 |
| ·转化烟草的Northern杂交 | 第52-53页 |
| ·转化烟草的Southern杂交 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草植株的耐盐性分析 | 第54-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-71页 |
| ·pROKⅡ-LbGRP植物表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·农杆菌重组质粒的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第60页 |
| ·转基因烟草植株的分子鉴定 | 第60-62页 |
| ·转基因烟草植株的耐盐性分析 | 第62-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录A | 第81-82页 |
| 附录B | 第82-83页 |
| 附录C | 第83-86页 |
| 附录D | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
