| 提要 | 第1-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-34页 |
| 1. 细胞外基质 | 第12-13页 |
| 2. 基质金属蛋白酶 | 第13-32页 |
| ·基质金属蛋白酶简介 | 第13页 |
| ·基质金属蛋白酶结构 | 第13-15页 |
| ·基质金属蛋白酶的分类 | 第15-18页 |
| ·分泌型MMPs | 第15-17页 |
| ·膜型基质金属蛋白酶(MT-MMP) | 第17页 |
| ·其他的MMPs | 第17-18页 |
| ·基质金属蛋白酶的功能 | 第18-19页 |
| ·MMP 的活化和调控 | 第19-22页 |
| ·MMP 底物 | 第22页 |
| ·MMPs 与疾病的关系 | 第22-32页 |
| ·MMPs与心血管疾病 | 第22-24页 |
| ·MMPs与组织纤维化 | 第24-26页 |
| ·MMPs与关节炎 | 第26-28页 |
| ·MMPs与肿瘤 | 第28-31页 |
| ·MMPs 和脑部缺血与再灌注 | 第31-32页 |
| 3. 本论文的研究目的和策略 | 第32-34页 |
| 第二章 重组MMP-16的表达、纯化和复性 | 第34-53页 |
| 1. 前言 | 第34-36页 |
| ·概述 | 第34页 |
| ·MT3-MMP/MMP-16 | 第34-35页 |
| ·包涵体复性 | 第35-36页 |
| ·复性蛋白质的检测 | 第36页 |
| 2. 材料和方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·细胞株 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第38-42页 |
| ·包涵体分离纯化试剂 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳试剂 | 第38-40页 |
| ·包涵体处理试剂 | 第40页 |
| ·Zymography 电泳试剂 | 第40-42页 |
| 3. 方法 | 第42-45页 |
| ·MT3-MMP 的诱导表达 | 第42页 |
| ·包涵体的分离和洗涤 | 第42-43页 |
| ·包涵体的溶解 | 第43页 |
| ·MT3-MMP 包涵体的金属螯合层析 | 第43页 |
| ·HPLC | 第43页 |
| ·凝胶过滤柱复性 | 第43页 |
| ·MT3-MMP 活力检测 | 第43-44页 |
| ·计算Km 和Kcat/Km | 第44-45页 |
| 4. 结果和讨论 | 第45-52页 |
| ·MT3-MMP 的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·MT3-MMP 表达产物包涵体的洗涤 | 第46页 |
| ·包涵体的溶解 | 第46-47页 |
| ·MT3-MMP 包涵体蛋白的金属螯合层析 | 第47-48页 |
| ·HPLC | 第48-49页 |
| ·凝胶过滤柱复性 | 第49-50页 |
| ·计算Km 和Kcat/Km | 第50-52页 |
| 5. 结论 | 第52-53页 |
| 第三章 基质金属蛋白酶抑制剂的筛选 | 第53-64页 |
| 1. 前言 | 第53-58页 |
| ·基质金属蛋白酶抑制剂 | 第53-55页 |
| ·黄酮类天然产物 | 第55-58页 |
| ·生物类黄酮的抗癌作用 | 第55-56页 |
| ·生物类黄酮抗癌机理探讨 | 第56-58页 |
| ·对MMP 有抑制的黄酮类化合物 | 第58页 |
| 2. 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·主要试剂和实验材料 | 第58页 |
| ·用于筛选的化合物 | 第58-59页 |
| ·仪器 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·方法 | 第59页 |
| 3. 结果和讨论 | 第59-62页 |
| ·检测到的对MMPs 有较好抑制的黄酮类化合物：野黄芩素(Scutellarein) | 第59-60页 |
| ·理化性质 | 第59-60页 |
| ·主要用途和药理功能 | 第60页 |
| ·野黄芩素对MMP 的抑制活性 | 第60-62页 |
| 4. 结论 | 第62-64页 |
| 第四章 用分子模拟方法研究MMPs 与抑制剂分子的相互作用 | 第64-86页 |
| 1. 前言 | 第64-66页 |
| ·概述 | 第64页 |
| ·模型与计算方法 | 第64-66页 |
| ·模型搭建与优化. | 第64-65页 |
| ·分子对接 | 第65-66页 |
| ·分子动力学模拟 | 第66页 |
| ·轨迹分析 | 第66页 |
| 2. 结果与讨论 | 第66-84页 |
| ·蛋白质三维结构的筛选结果 | 第66-67页 |
| ·MMP-1 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第67-70页 |
| ·MMP-3 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第70-72页 |
| ·MMP-7 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第72-74页 |
| ·MMP-8 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第74-77页 |
| ·MMP-9 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第77-79页 |
| ·MMP-13 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第79-81页 |
| ·MMP-16 和野黄芩素的分子对接与分子动力学模拟 | 第81-84页 |
| 3. 结论 | 第84-86页 |
| 第五章 野黄芩素对人纤维肉瘤细胞HT1080 的影响 | 第86-114页 |
| 1. 前言 | 第86-87页 |
| ·概述 | 第86页 |
| ·基质金属蛋白酶的转录及其调控 | 第86-87页 |
| 2. 材料和试剂 | 第87-92页 |
| ·耗材 | 第87-88页 |
| ·细胞株 | 第88页 |
| ·仪器 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88-92页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂 | 第88-89页 |
| ·Zymography电泳试剂 | 第89-90页 |
| ·免疫印迹试剂 | 第90-91页 |
| ·细胞实验所用试剂 | 第91-92页 |
| 3. 方法 | 第92-98页 |
| ·细胞培养 | 第92-93页 |
| ·细胞总RNA 提取 | 第93页 |
| ·RT-PCR | 第93-95页 |
| ·免疫印迹 | 第95页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第95-96页 |
| ·Zymography检测细胞上清中MMP-2 / MMP-9 活性 | 第96页 |
| ·细胞增殖实验 | 第96-97页 |
| ·野黄芩素对HT1080细胞形态影响的观察 | 第97-98页 |
| ·细胞迁移实验（细胞划痕法） | 第97页 |
| ·细胞伸展实验(细胞的三维培养) | 第97-98页 |
| 4. 结果和讨论 | 第98-111页 |
| ·细胞增殖实验结果 | 第98-99页 |
| ·不同浓度的野黄芩素对HT1080 细胞表达MMPs 的影响 | 第99-102页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第99-101页 |
| ·免疫印记结果 | 第101页 |
| ·酶谱实验结果 | 第101-102页 |
| ·20μM的野黄芩素作用HT1080细胞不同时间对细胞表达MMPs的影响 | 第102-105页 |
| ·RT-PCR 实验结果 | 第102-104页 |
| ·免疫印记实验结果 | 第104页 |
| ·酶谱实验结果 | 第104-105页 |
| ·野黄芩素对HT1080细胞迁移能力的影响 | 第105-107页 |
| ·野黄芩素对HT1080 细胞伸展的影响 | 第107-108页 |
| ·野黄芩素对HT1080 细胞侵润能力的影响 | 第108-110页 |
| ·野黄芩素影响HT1080 细胞中MMPs 表达的分子机制研究 | 第110-111页 |
| 5. 讨论 | 第111-114页 |
| 小结 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-126页 |
| 博士期间发表论文 | 第126-127页 |
| 中文摘要 | 第127-129页 |
| 英文摘要 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
