| Abstract | 第1-8页 |
| Chapter one: Introduction | 第8-13页 |
| ·Maize production | 第8-9页 |
| ·Northern corn leaf blight (NCLB) disease | 第9页 |
| ·Disease symptoms | 第9-10页 |
| ·Disease Cycle | 第10页 |
| ·NPS6 gene | 第10-11页 |
| ·Gene cloning | 第11-13页 |
| Chapter Two: cloning of the NPS6 gene in Setosphaeria turcica, | 第13-34页 |
| ·Method used: Genome walking | 第13页 |
| ·Maretials | 第13页 |
| ·Reagents | 第13页 |
| ·Major Equipments | 第13页 |
| ·Solutions | 第13-14页 |
| ·Collection and preparation of Plant material | 第14页 |
| ·Isolation of the pathogen | 第14页 |
| ·Genome DNA extraction from fungal mycelia (CTAB method) | 第14-15页 |
| ·DNA dilution | 第15页 |
| ·Primers designing | 第15-16页 |
| ·PCR Amplification | 第16-19页 |
| ·Electrophoressis | 第19页 |
| ·Plasmid extraction | 第19-20页 |
| ·Plasmid digestion | 第20页 |
| ·Result | 第20页 |
| ·Isolation of the pathogen | 第20-21页 |
| ·DNA extraction | 第21页 |
| ·Primers designing method | 第21-23页 |
| ·PCR PRODUCTS | 第23页 |
| ·Cloning of the full-length gene | 第23-34页 |
| Chapter Three: Knockout vector construction | 第34-44页 |
| ·Materials | 第34页 |
| ·Vector | 第34页 |
| ·Reagents | 第34页 |
| ·Major equipment; | 第34-35页 |
| ·Solutions and culture medium | 第35页 |
| ·Methods | 第35页 |
| ·Primer design | 第35页 |
| ·PCR Amplification | 第35页 |
| ·Cloning Left Flank, | 第35页 |
| ·PCR reaction mixture | 第35-36页 |
| ·PCR Conditions/Cycles : | 第36页 |
| 3 .12 Cloning Right Flank, PCR Reaction mixture: | 第36页 |
| ·PCR Conditions/Cycles : | 第36页 |
| ·PCR product recovering | 第36-37页 |
| ·Ligation | 第37页 |
| ·Transformation to the competent cell Escherichia coli (DH5α cell) | 第37-38页 |
| ·Plasmid extraction | 第38页 |
| ·Plasmid digestion to get inserts for sequencing | 第38页 |
| ·Left Flank, Digestion mixture : | 第38-39页 |
| ·Right Flank, the digestion mixture : | 第39页 |
| ·Digesting a pXEH Vector | 第39页 |
| ·Ligation of flanks to the vector | 第39-40页 |
| ·Ligation of right flank to the vector which contain left flank insert | 第40页 |
| ·Flanks insertion confirmation | 第40页 |
| ·RESULT | 第40页 |
| ·Original pXEH Vector before manipulated | 第40-41页 |
| ·Cloning of flanks | 第41-42页 |
| ·Constructed of knock-out Vector | 第42-43页 |
| ·Insertion confirmation | 第43-44页 |
| Chapter Four: Protoplasts preparation and transformation | 第44-52页 |
| ·Fungal Strain | 第44页 |
| ·Reagents | 第44页 |
| ·Major equipments; | 第44页 |
| ·Solutions and culture medium | 第44-45页 |
| ·Method | 第45页 |
| ·Protoplast preparation | 第45-46页 |
| ·Protoplasts regeneration and transformation | 第46页 |
| ·Transformants in the growing medium | 第46-47页 |
| ·Transformants DNA Extraction | 第47页 |
| ·Screening for the mutants | 第47-48页 |
| ·PCR reaction mixture | 第48页 |
| ·PCR Condition/program : | 第48页 |
| ·Presense of NPS6 gene to the transformants | 第48页 |
| ·PCR Reaction mixture : | 第48页 |
| ·PCR Programme/Conditions : | 第48-49页 |
| ·Confirm for the presence of mutants | 第49页 |
| ·PCR Conditions/Program : | 第49页 |
| ·RESULT. | 第49页 |
| ·Screening of the mutants | 第49页 |
| ·Presence in hph gene in the transformants | 第49-50页 |
| ·Presence of NPS6 gene to the transformants | 第50-51页 |
| ·PCR amplified for knockout mutants | 第51-52页 |
| Chepter Five: Dicussion and conclution | 第52-53页 |
| References | 第53-56页 |
| Acknowledgement | 第56页 |
