| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 缩略语表 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-32页 |
| 1. 畜禽场废弃物对环境的污染 | 第18-19页 |
| 2. 猪粪堆肥技术研究进展 | 第19-23页 |
| ·好氧堆肥的概念 | 第19页 |
| ·好氧堆肥的基本原理 | 第19-20页 |
| ·好氧堆肥的条件 | 第20-22页 |
| ·碳氮比(C/N)的调节 | 第20-21页 |
| ·pH值的调节 | 第21页 |
| ·水分含量的调节 | 第21页 |
| ·温度的调节 | 第21-22页 |
| ·通风供氧 | 第22页 |
| ·微生物接种剂 | 第22页 |
| ·调理剂的选择与应用 | 第22-23页 |
| ·调理剂的种类 | 第23页 |
| ·调理剂在堆肥中的应用 | 第23页 |
| 3. 堆肥微生物的研究应用 | 第23-26页 |
| ·堆肥微生物的种类 | 第23-24页 |
| ·细菌 | 第24页 |
| ·真菌 | 第24页 |
| ·放线菌 | 第24页 |
| ·堆肥外源微生物的接种 | 第24-25页 |
| ·不同堆肥阶段微生物种类的变化 | 第25页 |
| ·外源微生物接种在堆肥中应用 | 第25-26页 |
| 4. 研究堆肥微生物的分子生物学方法 | 第26-32页 |
| ·16SrRNA序列分析技术在堆肥微生物研究中的应用 | 第26-30页 |
| ·样品微生物总DNA的提取与纯化 | 第26-28页 |
| ·限制性片段长度多态性分析(RFLP) | 第28页 |
| ·末端限制性片段长度多态性(T-RFLP) | 第28-29页 |
| ·变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术与温度梯度电泳(TGGE)技术 | 第29-30页 |
| ·研究堆肥微生物的其它方法 | 第30-32页 |
| ·传统稀释培养分离方法 | 第30页 |
| ·磷脂脂肪酸甲酯法(PLFA) | 第30-32页 |
| 第二章 不同调理剂对猪粪堆肥过程的影响 | 第32-50页 |
| 1 目的与意义 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·试验材料 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-39页 |
| ·试验处理及分组 | 第33-34页 |
| ·样品的采集、处理与保存 | 第34页 |
| ·试剂及配制方法 | 第34-35页 |
| ·各指标测定方法 | 第35-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-47页 |
| ·堆体的物理表观性状 | 第39页 |
| ·无害化卫生学 | 第39-40页 |
| ·堆体温度的变化 | 第40-42页 |
| ·堆肥含水率的变化 | 第42-43页 |
| ·堆肥pH值的变化 | 第43-44页 |
| ·堆肥中有机碳的变化 | 第44-45页 |
| ·堆肥中全氮的变化 | 第45-46页 |
| ·发芽指数 | 第46-47页 |
| 4 分析与讨论 | 第47-49页 |
| ·温度对堆肥过程的影响 | 第47页 |
| ·堆肥过程中有机碳的损失 | 第47-48页 |
| ·堆肥过程中氮元素的损失 | 第48页 |
| ·堆肥腐熟的判断 | 第48-49页 |
| 5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 堆肥中产葡聚糖内切酶菌株的筛选及葡聚糖内切酶基因的外源表达 | 第50-87页 |
| 1 试验目的与意义 | 第50页 |
| 2 实验材料 | 第50-66页 |
| ·堆肥样品 | 第50页 |
| ·试剂与仪器 | 第50-54页 |
| ·实验试剂 | 第50-51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·缓冲液及常用试剂的配置 | 第51-54页 |
| ·培养基 | 第54-56页 |
| ·载体和菌株 | 第56-57页 |
| ·纤维素降解菌株的分离、纯化与鉴定 | 第57-60页 |
| ·菌种的富集、纯化与筛选 | 第57页 |
| ·分离微生物总基因组DNA的提取、纯化 | 第57-58页 |
| ·PCR反应 | 第58页 |
| ·PCR产物的回收纯化、克隆和测序 | 第58页 |
| ·纯化的PCR产物与载体连接 | 第58-59页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法制备感受态) | 第59页 |
| ·连接产物的转化 | 第59页 |
| ·阳性克隆子鉴定 | 第59-60页 |
| ·纤维素酶活性的测定 | 第60-61页 |
| ·待测酶液的制备 | 第60页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第60页 |
| ·CMC酶活性测定方法 | 第60-61页 |
| ·筛选菌株液体发酵条件优化 | 第61-62页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第61页 |
| ·不同碳源比例对产酶的影响 | 第61页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·不同的氮源含量对产酶的影响 | 第62页 |
| ·起始pH对产酶的影响 | 第62页 |
| ·温度对产酶的影响 | 第62页 |
| ·发酵时间对产酶的影响 | 第62页 |
| ·纤维素酶的酶学特性研究 | 第62-63页 |
| ·总DNA的提取 | 第63页 |
| ·Eg1基因引物的设计与合成 | 第63页 |
| ·基因Eg1的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·基因序列的生物信息学分析 | 第64页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第64-66页 |
| ·原核表达引物 | 第64页 |
| ·质粒的提取及酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·表达蛋白的诱导与SDS-PAGE检测 | 第65-66页 |
| ·表达蛋白的活性检测 | 第66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-82页 |
| ·菌株的分离、筛选与鉴定 | 第66-69页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第69-74页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第69-70页 |
| ·发酵培养基碳源的选择 | 第70-71页 |
| ·培养基中碳源含量对产酶的影响 | 第71页 |
| ·氮源对产酶的影响 | 第71-72页 |
| ·培养基中氮源含量对产酶的影响 | 第72页 |
| ·培养基中的初始pH值对产酶的影响 | 第72-73页 |
| ·发酵温度对产酶的影响 | 第73页 |
| ·发酵时间对产酶的影响 | 第73-74页 |
| ·CMC酶的酶学性质研究 | 第74-76页 |
| ·不同的pH值对酶活性的影响 | 第74页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第74-75页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第75页 |
| ·pH值对酶稳定性的影响 | 第75-76页 |
| ·温度对酶稳定性的影响 | 第76页 |
| ·枯草芽孢杆菌DNA的提取 | 第76-77页 |
| ·基因的PCR扩增与测序 | 第77-79页 |
| ·原核表达载体的构建结果 | 第79-80页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第80-82页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第80-81页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第81页 |
| ·融合表达产物的可溶性分析 | 第81-82页 |
| ·融合表达产物的酶活性分析 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-86页 |
| ·产酶菌株的分离与筛选 | 第82-83页 |
| ·测定酶活性时底物的选择 | 第83页 |
| ·酶活性的定量分析 | 第83-84页 |
| ·不同的碳源对菌株产酶的影响 | 第84页 |
| ·不同的氮源对菌株产酶的影响 | 第84页 |
| ·培养基初始pH值对菌体产酶的影响 | 第84-85页 |
| ·外源表达条件的优化 | 第85-86页 |
| 5 本章小结 | 第86-87页 |
| 第四章 堆肥中接种外源微生物对微生物群落的影响 | 第87-113页 |
| 1. 目的与意义 | 第87页 |
| 2. 材料与方法 | 第87-94页 |
| ·试验器材 | 第87-88页 |
| ·试验药品 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·试剂盒 | 第88页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第88-89页 |
| ·堆肥样品基因组DNA提取、纯化 | 第89-92页 |
| ·细胞裂解方法A | 第89页 |
| ·细胞裂解方法B | 第89-90页 |
| ·细胞裂解方法C | 第90页 |
| ·细胞计数 | 第90-91页 |
| ·DNA纯化和回收 | 第91页 |
| ·PCR扩增和酶切 | 第91页 |
| ·基因组DNA的琼脂糖凝胶检测 | 第91-92页 |
| ·PCR反应 | 第92-93页 |
| ·PCR引物 | 第92页 |
| ·PCR反应 | 第92页 |
| ·PCR反应产物的检测 | 第92-93页 |
| ·PCR产物的回收纯化、克隆、FRLP分析和测序 | 第93页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第93页 |
| ·纯化的PCR产物与载体连接 | 第93页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法制备感受态) | 第93页 |
| ·连接产物的转化 | 第93页 |
| ·阳性克隆子鉴定 | 第93页 |
| ·RFLP分析 | 第93页 |
| ·序列类型分析 | 第93页 |
| ·系统进化分析 | 第93-94页 |
| 3. 结果与讨论 | 第94-109页 |
| ·不同的裂解方法对堆肥中微生物细胞裂解效率的比较 | 第94页 |
| ·DNA提取量与回收效率 | 第94-95页 |
| ·DNA模板的可扩增性与可酶切性 | 第95-97页 |
| ·堆体温度的变化 | 第97-98页 |
| ·堆肥样品微生物总DNA的提取 | 第98页 |
| ·PCR反应 | 第98-99页 |
| ·RFLP分析 | 第99-109页 |
| ·酶切分析 | 第99-100页 |
| ·升温期样品微生物群落分析 | 第100-103页 |
| ·高温期堆肥样品微生物群落分析 | 第103-106页 |
| ·降温期微生物群落分析 | 第106-109页 |
| 4. 讨论 | 第109-111页 |
| ·堆肥微生物DNA的提取 | 第109-110页 |
| ·堆肥中温度的变化 | 第110页 |
| ·堆肥微生物群落结构分析方法的选用 | 第110-111页 |
| ·接种外源菌株对堆肥微生物群落的影响 | 第111页 |
| 5. 本章小结 | 第111-113页 |
| 第五章 总结 | 第113-115页 |
| 1 本研究获得的结果 | 第113页 |
| 2 本研究的创新点 | 第113-114页 |
| 3 下一步值得研究的工作 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 博士在读期间发表论文及研究成果 | 第127页 |
