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水稻高温高光敏感突变体ls1的筛选及基因功能研究

摘要第6-7页
abstract第7-8页
第一章 引言第13-29页
    1.1 高温对植物的影响第13-17页
        1.1.1 高温对呼吸作用的影响第13-14页
        1.1.2 高温对蒸腾作用的影响第14页
        1.1.3 高温对光合作用的影响第14-17页
        1.1.4 高温对植物体内渗透调节物质含量的影响第17页
    1.2 高光对植物的影响第17-19页
        1.2.1 光抑制第18-19页
        1.2.2 光氧化第19页
    1.3 ROS的产生及危害第19-21页
        1.3.1 脂质过氧化第20页
        1.3.2 蛋白质氧化第20页
        1.3.3 DNA损伤第20-21页
    1.4 ROS清除第21-23页
        1.4.1 酶类抗氧化系统第21-22页
        1.4.2 非酶类抗氧化系统第22-23页
    1.5 ROS信号传导第23-24页
    1.6 RNaseH研究进展第24-28页
        1.6.1 RNaseH的分类第24-26页
        1.6.2 RNaseH的功能第26-28页
    1.7 本研究的目的与意义第28-29页
第二章 实验材料与方法第29-42页
    2.1 实验材料第29页
    2.2 常用实验试剂与仪器第29页
        2.2.1 常用实验试剂第29页
        2.2.2 实验仪器第29页
    2.3 实验方法第29-42页
        2.3.1 突变体处理条件第29-30页
        2.3.2 水稻叶片叶绿素含量测定第30-31页
        2.3.3 叶片扫描电镜分析第31页
        2.3.4 叶片透射电镜分析第31页
        2.3.5 叶片石蜡切片分析第31-32页
        2.3.6 水稻DNA提取第32页
        2.3.7 水稻总RNA提取第32-33页
        2.3.8 RNA反转录第33页
        2.3.9 PCR反应第33-34页
        2.3.10 琼脂糖凝胶电泳第34页
        2.3.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳第34页
        2.3.12 PCR扩增片段的凝胶回收第34-35页
        2.3.13 载体构建第35页
        2.3.14 农杆菌感受态制备第35页
        2.3.15 大肠杆菌质粒提取第35-36页
        2.3.16 大肠杆菌与农杆菌转化第36页
        2.3.17 水稻原生质体的制备与转化第36-37页
        2.3.18 农杆菌侵染烟草第37页
        2.3.19 水稻转基因第37-38页
        2.3.20 TUNEL实验第38页
        2.3.21 彗星实验第38-40页
        2.3.22 WesternBolt分析第40-41页
        2.3.23 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色和二氨基联苯胺(DAB)染色第41页
        2.3.24 ROS、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性测定第41页
        2.3.25 植物相对含水量测定第41页
        2.3.26 外源还原剂处理第41-42页
第三章 结果与分析第42-59页
    3.1 突变体ls1表型观察第42-48页
        3.1.1 突变体ls1局部损伤表型对高温高光敏感第42-44页
        3.1.2 叶绿素含量测定第44-45页
        3.1.3 叶片细胞学分析第45-46页
        3.1.4 叶片透射电镜与扫描电镜分析第46-48页
    3.2 突变体ls1的遗传分析第48页
    3.3 基因定位第48-49页
    3.4 转基因功能验证第49-51页
    3.5 ls1编码水稻中一个核糖核酸酶H2 中的A大亚基第51-52页
    3.6 ls1表达分析和亚细胞定位第52-53页
    3.7 ls1突变导致DNA损伤和DNA损伤响应第53-54页
    3.8 在高温高光下突变体ls1内ROS过量积累第54-57页
    3.9 施加外源还原剂可缓解ls1突变体在高温高光下的表型第57页
    3.10 叶绿素降解与衰老相关基因表达第57-58页
    3.11 抗氧化相关基因表达第58-59页
第四章 讨论第59-63页
    4.1 高温高光敏感突变体ls1影响叶片发育第59页
    4.2 ls1的突变促进了基因组的不稳定性第59-60页
    4.3 ls1的突变导致ROS的积累第60页
    4.4 ROS介导ls1突变体中叶绿素降解、衰老和抗氧化相关基因的表达第60-63页
第五章 全文结论第63-64页
参考文献第64-77页
附录第77-85页
致谢第85-86页
作者简历第86页

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