| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| Preface | 第16-25页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 中文部分 | 第25-62页 |
| 第一部分 Snail1在结直肠癌的表达与患者预后及 5-氟尿嘧啶耐药相关 | 第25-34页 |
| 1.前言 | 第25页 |
| 2.材料和方法 | 第25-30页 |
| 2.1 设备和实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 Snail1 过表达细胞系构建 | 第26-27页 |
| 2.3 细胞总RNA提取、反转录及实时定量PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.4 CCK-8 检测细胞毒性实验 | 第28-29页 |
| 2.5 免疫组织化学染色 | 第29-30页 |
| 2.6 统计学处理 | 第30页 |
| 3.结果 | 第30-33页 |
| 3.1 Snail1 在肠癌中高表达与较差预后相关 | 第30-31页 |
| 3.2 Snail1 在肠癌中高表达与化疗抵抗相关 | 第31-32页 |
| 3.3 过表达Snail1 肠癌细胞系对5-氟尿嘧啶敏感性下降 | 第32-33页 |
| 4.讨论 | 第33页 |
| 5.小结 | 第33-34页 |
| 第二部分 DKK4参与Snail1诱导的结直肠癌对5-氟尿嘧啶的抵抗 | 第34-41页 |
| 1.前言 | 第34-35页 |
| 2.材料和方法 | 第35-37页 |
| 2.1 设备及仪器 | 第35页 |
| 2.2 DKK4及Snail1 si-RNA转染及验证 | 第35-36页 |
| 2.3 CCK-8 检测细胞毒性实验 | 第36页 |
| 2.4 免疫组织化学染色 | 第36-37页 |
| 2.5 统计学处理 | 第37页 |
| 3.结果 | 第37-39页 |
| 3.1 在肠癌细胞系中上调Snail1 能够提高DKK4 表达 | 第37页 |
| 3.2 在肠癌患者组织芯片中DKK4与Snail1 表达相关 | 第37页 |
| 3.3 在人结直肠癌细胞系中感染DKK4 表达能够逆转Snail1 引起的结直肠癌对5-氟尿嘧啶的抵抗作用 | 第37-39页 |
| 4.讨论 | 第39-40页 |
| 5.小结 | 第40-41页 |
| 第三部分 USP53 在肠癌中表达下降与耐药、预后相关 | 第41-52页 |
| 1.前言 | 第41页 |
| 2.材料和方法 | 第41-45页 |
| 2.1 设备及仪器 | 第41-42页 |
| 2.2 USP53 过表达质粒构建 | 第42页 |
| 2.3 质粒转染、RNA抽提及实时定量PCR鉴定 | 第42页 |
| 2.4 Western Blot验证细胞内过表达USP | 第42-44页 |
| 2.5 细胞增殖检验及克隆形成实验 | 第44页 |
| 2.6 免疫组织化学染色 | 第44-45页 |
| 2.7 冰冻组织总RNA抽提、反转录及实时定量PCR检测 | 第45页 |
| 2.8 统计学处理 | 第45页 |
| 3.结果 | 第45-50页 |
| 3.1 USP53 在结直肠癌中表达显著低于正常组织 | 第45-46页 |
| 3.2 TCGA数据中USP53 mRNA水平与预后相关 | 第46-47页 |
| 3.3 在人结直肠癌细胞系HCT116 中瞬时过表达USP53 能抑制细胞增殖 | 第47-49页 |
| 3.4 TCGA数据库中USP53 与患者肿瘤大小及化疗耐药相关 | 第49-50页 |
| 4.讨论 | 第50-51页 |
| 5.小结 | 第51-52页 |
| 第四部分 肠癌病人 Organoids 培养体系 | 第52-61页 |
| 1.前言 | 第52-53页 |
| 2.材料和方法 | 第53-55页 |
| 2.1 设备及试剂 | 第53页 |
| 2.2 培养基配置 | 第53页 |
| 2.3 标本处理 | 第53-54页 |
| 2.4 Organoids传代、冻存及复苏 | 第54页 |
| 2.5 Organoids组织切片、HE染色、免疫组织化学染色、阿尔新蓝染色及PAS染色 | 第54-55页 |
| 2.6 Organoids总 RNA提取、反转录及实时定量PCR检测 | 第55页 |
| 2.7 统计学处理 | 第55页 |
| 3.结果 | 第55-58页 |
| 3.1 部分肠癌Organoids生长需要R-Spondin-3,Noggin以及Wnt3A | 第55-56页 |
| 3.2 部分肠癌Organoids生长不需要R-Spondin-3,Noggin以及Wnt3A | 第56页 |
| 3.3 肠癌患者Organoids免疫组织化学染色及HE染色 | 第56-58页 |
| 4.讨论 | 第58-60页 |
| 5.小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 英文部分 | 第62-101页 |
| Part I The expression of Snail1 in colorectal cancer is associated with prognosis and 5-fluorouracil resistance | 第62-72页 |
| Part II DKK4 is involved in Snail1-induced colorectal cancer resistance to 5-fluorouracil | 第72-80页 |
| Part III The expression of USP53 in colorectal cancer was associated with resistance and prognosis | 第80-91页 |
| Part IV Colorectal cancer tissue | 第91-100页 |
| Conclusions | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 攻读学位期间撰写与发表的学术论文目录 | 第112-113页 |
| 八年制学位论文要求 | 第113-115页 |
