| 中文摘要 | 第4-5页 |
| 英文摘要 | 第5-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 ZEB1 | 第13-17页 |
| 1.1.1 简介 | 第13页 |
| 1.1.2 ZEB1的功能 | 第13-15页 |
| 1.1.3 ZEB1与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.1.4 肝细胞癌中ZEB1的表达及意义 | 第16-17页 |
| 1.2 磷酸果糖激酶 | 第17-21页 |
| 1.2.1 简介 | 第17-19页 |
| 1.2.2 PFK的结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.2.3 PFK的临床意义 | 第20-21页 |
| 1.3 立题背景 | 第21-22页 |
| 第二章 方法与材料 | 第22-42页 |
| 2.1 基因克隆相关实验方法 | 第22-29页 |
| 2.1.1 质粒载体 | 第22-23页 |
| 2.1.2 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第23-24页 |
| 2.1.3 PCR反应 | 第24-25页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶电泳分离DNA并鉴定DNA片段大小 | 第25页 |
| 2.1.5 DNA片段回收 | 第25-26页 |
| 2.1.6 DNA连接 | 第26-27页 |
| 2.1.7 构建shRNA质粒和点突变质粒 | 第27页 |
| 2.1.8 DNA转化 | 第27-28页 |
| 2.1.9 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2 细胞实验 | 第29-31页 |
| 2.2.1 质粒转染 | 第29-30页 |
| 2.2.2 慢病毒包装与感染 | 第30页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.3 蛋白质电泳与western blot分析 | 第31-33页 |
| 2.4 实时荧光定量聚合酶链反应 | 第33-35页 |
| 2.4.1 细胞总RNA提取 | 第33页 |
| 2.4.2 样品cDNA合成 | 第33-34页 |
| 2.4.3 定量PCR | 第34-35页 |
| 2.5 葡萄糖摄取与乳酸生成测定 | 第35-36页 |
| 2.6 染色质免疫共沉淀 | 第36-37页 |
| 2.7 细胞增殖实验 | 第37-39页 |
| 2.7.1 细胞计数 | 第37-38页 |
| 2.7.2 MTT 比色法 | 第38页 |
| 2.7.3 细胞克隆形成实验 | 第38-39页 |
| 2.8 细胞迁移与侵袭实验 | 第39-40页 |
| 2.8.1 细胞划痕实验 | 第39页 |
| 2.8.2 Transwell实验 | 第39-40页 |
| 2.9 临床肝癌大样本数据库分析 | 第40页 |
| 2.10 实验材料和仪器 | 第40页 |
| 2.11 数据的统计学分析 | 第40-42页 |
| 第三章 结果 | 第42-57页 |
| 3.1 HCC中ZEB1高表达 | 第42-44页 |
| 3.2 ZEB1能够调控PFKM的表达 | 第44-48页 |
| 3.3 ZEB1能够直接结合编码PFKM基因的启动子区域 | 第48-50页 |
| 3.4 ZEB1通过调控PFKM促进HCC细胞的有氧糖酵解 | 第50-53页 |
| 3.5 ZEB1通过调控PFKM促进HCC细胞的增殖和侵袭 | 第53-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 成果 | 第67页 |
