| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 β-葡萄糖苷酶概述 | 第11-14页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶简介 | 第11页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶的分类与结构 | 第11-12页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶的性质 | 第12-13页 |
| 1.3.1 相对分子量 | 第12页 |
| 1.3.2 最适温度及热稳定性 | 第12-13页 |
| 1.3.3 最适pH及pH稳定性 | 第13页 |
| 1.4 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.4.1 β-葡萄糖苷酶在食品方面的应用 | 第13-14页 |
| 1.4.2 β-葡萄糖苷酶在工业中的应用 | 第14页 |
| 1.4.3 β-葡萄糖苷酶在医药中的应用 | 第14页 |
| 2 宏基因组学简介 | 第14-18页 |
| 2.1 宏基因组学简述 | 第14-15页 |
| 2.2 宏基因组文库的筛选 | 第15-17页 |
| 2.3 土壤宏基因组文库筛选新型生物酶类的国内外研究进展 | 第17-18页 |
| 3 本实验研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 4 本实验研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 土壤宏基因组文库筛选新型β-葡萄糖苷酶基因 | 第21-31页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 土壤样品 | 第21页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第21页 |
| 1.3 功能筛选培养基 | 第21-22页 |
| 1.4 工具酶及主要试剂 | 第22页 |
| 1.5 实验仪器 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.1 土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶的筛选 | 第22-23页 |
| 2.2 产β-葡萄糖苷酶菌株的亚克隆菌株制备 | 第23-26页 |
| 2.2.1 亚克隆载体的构建 | 第23页 |
| 2.2.2 亚克隆质粒的酶切及回收 | 第23-25页 |
| 2.2.3 目的片段与载体的连接转化 | 第25-26页 |
| 2.3 目的片段的生物信息学分析 | 第26页 |
| 3 实验结果与分析 | 第26-29页 |
| 3.1 土壤宏基因组文库产β-葡萄糖苷酶基因及亚克隆菌株筛选 | 第26-27页 |
| 3.2 亚克隆基因序列分析 | 第27-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶基因的异源表达 | 第31-43页 |
| 1 实验材料 | 第31-33页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第31页 |
| 1.2 实验主要试剂与溶液 | 第31-33页 |
| 1.3 酶及试剂盒 | 第33页 |
| 1.4 实验仪器 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.1 表达宿主E.coli BL21感受态的制备 | 第33-34页 |
| 2.2 β-葡萄糖苷酶基因的扩增 | 第34-35页 |
| 2.3 克隆产物和表达载体的酶切与回收 | 第35-36页 |
| 2.4 重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.5 重组质粒的诱导表达 | 第37页 |
| 2.6 β-葡萄糖苷酶的亲和层析纯化 | 第37-38页 |
| 2.7 纯化蛋白的SDS-PAGE凝胶检测 | 第38页 |
| 2.8 纯化蛋白的定量 | 第38页 |
| 3 实验结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.1 β-葡萄糖苷酶基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.2 重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.3 重组β-葡萄糖苷酶基因的诱导表达及纯化 | 第40-41页 |
| 3.4 β-葡萄糖苷酶活性蛋白表达量的测定 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶YNBG3的酶学性质研究 | 第43-55页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1 实验试剂 | 第43页 |
| 1.2 实验溶液 | 第43页 |
| 1.3 实验仪器 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-46页 |
| 2.1 YNBG3酶活性测定的标准曲线 | 第44页 |
| 2.2 YNBG3酶促反应时间的确定 | 第44页 |
| 2.3 YNBG3酶活测定的方法 | 第44-45页 |
| 2.4 YNBG3的酶学动力参数测定 | 第45页 |
| 2.5 pH对YNBG3酶活影响及对其稳定性研究 | 第45页 |
| 2.6 温度对YNBG3酶活影响及其热稳定性研究 | 第45-46页 |
| 2.7 不同金属离子对YNBG3酶活的影响 | 第46页 |
| 2.8 不同化合物对YNBG3酶活的影响 | 第46页 |
| 2.9 葡萄糖对YNBG3反馈抑制分析 | 第46页 |
| 2.10 YNBG3的耐盐能力测定 | 第46页 |
| 3 实验结果与分析 | 第46-53页 |
| 3.1 对硝基苯酚标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 3.2 YNBG3酶促反应时间的确定 | 第47-48页 |
| 3.3 YNBG3的酶学动力参数确定 | 第48页 |
| 3.4 pH对YNBG3酶活影响及对其稳定性测定 | 第48-50页 |
| 3.5 温度对YNBG3酶活影响及其热稳定性测定 | 第50页 |
| 3.6 不同金属离子对YNBG3酶活的影响的测定 | 第50-51页 |
| 3.7 不同化合物对YNBG3酶活影响的测定 | 第51-52页 |
| 3.8 葡萄糖对YNBG3反馈抑制分析 | 第52页 |
| 3.9 YNBG3的耐盐能力分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 总结与展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第65页 |
