| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 缩略词表 | 第21-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-47页 |
| ·粘细菌简介 | 第23-30页 |
| ·粘细菌的典型特征及分类学地位 | 第23-24页 |
| ·粘细菌的次级代谢产物 | 第24-28页 |
| ·纤维堆囊菌及其次级代谢产物 | 第28-30页 |
| ·埃博霉素简介 | 第30-40页 |
| ·埃博霉素的发现及研究进展 | 第30-33页 |
| ·埃博霉素的生物合成及其研究进展 | 第33-36页 |
| ·埃博霉素生物合成中底物选择的研究进展 | 第36-40页 |
| ·生物过程的优化 | 第40-43页 |
| ·非统计学优化方法 | 第40页 |
| ·统计学优化方法 | 第40-43页 |
| ·纤维堆囊菌的遗传学研究 | 第43-45页 |
| ·本课题开展的思路及研究内容 | 第45-47页 |
| 第二章 纤维堆囊菌GSUV3-205生产埃博霉素的过程优化 | 第47-83页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第47-50页 |
| ·菌株 | 第47-48页 |
| ·培养基及试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第48-49页 |
| ·软件工具 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-61页 |
| ·埃博霉素的发酵合成 | 第50页 |
| ·埃博霉素的定量分析 | 第50-51页 |
| ·纤维堆囊菌GSUV3-205生产埃博霉素的培养条件优化 | 第51-53页 |
| ·接种量与发酵时间的组合实验 | 第51页 |
| ·接种量与种子培养及接种的状态的组合实验 | 第51-52页 |
| ·树脂添加时间和发酵培养转速的单因子实验 | 第52-53页 |
| ·纤维堆囊菌GSUV3-205生产埃博霉素的营养条件优化 | 第53-61页 |
| ·单因子实验 | 第53-54页 |
| ·Plackett-Burman(PB)设计 | 第54-56页 |
| ·Box-Behnken(BB)设计 | 第56-57页 |
| ·部分因子设计(Fractional factorial design,FFD) | 第57-59页 |
| ·中心组合实验(Central composite design,CCD) | 第59-61页 |
| ·实验结果及讨论 | 第61-81页 |
| ·So0157-2菌株简介及摇瓶发酵流程 | 第61-62页 |
| ·埃博霉素定量分析标准曲线的绘制 | 第62-64页 |
| ·接种量和发酵时间对埃博霉素产量的影响 | 第64-65页 |
| ·接种量和种子培养及接种的状态对埃博霉素产量的影响 | 第65-66页 |
| ·树脂添加时间和发酵培养转速对埃博霉素产量的影响 | 第66-67页 |
| ·单因子实验拓展和epothilone B合成相关的营养成分 | 第67-68页 |
| ·PB设计初步研究影响epothilone B合成的重要营养成分 | 第68-70页 |
| ·BB设计法初步确定发酵培养基的营养成分 | 第70-74页 |
| ·部分因子实验(FFD)获得影响epothilone B合成的关键营养成分 | 第74-76页 |
| ·中心组合实验(CCD)最终确定发酵培养基的营养成分 | 第76-79页 |
| ·多步骤响应面法优化GSUV3-205合成埃博霉素营养条件的讨论 | 第79-81页 |
| ·本章小结 | 第81-83页 |
| 第三章 小分子添加物对纤维堆囊菌GSUV3-205合成埃博霉素的影响 | 第83-102页 |
| ·引言 | 第83-84页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第84-85页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·培养基及试剂 | 第84-85页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-89页 |
| ·埃博霉素的发酵合成和定量分析 | 第85页 |
| ·不同状态铁离子的在发酵培养基中的添加 | 第85-86页 |
| ·甜菜碱及其类似物在发酵培养基中的添加 | 第86-87页 |
| ·不同混合的埃博霉素前体物质在发酵培养基中的添加 | 第87-88页 |
| ·丙酸钠和甲基丙二酸在发酵培养基中的分别添加 | 第88-89页 |
| ·实验结果及讨论 | 第89-99页 |
| ·不同状态铁离子的添加对埃博霉素合成的影响 | 第89-91页 |
| ·甜菜碱及其类似物的添加对埃博霉素合成的影响 | 第91-93页 |
| ·不同混合的埃博霉素前体物质的添加对埃博霉素合成的影响 | 第93-96页 |
| ·不同埃博霉素前体物质的单独添加对埃博霉素合成的影响 | 第96-99页 |
| ·本章小结 | 第99-102页 |
| 第四章 获取纤维堆囊菌GSUV3-205分散生长突变株的尝试 | 第102-133页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第103-108页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第103-104页 |
| ·主要培养基 | 第104页 |
| ·主要实验试剂 | 第104-107页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第107-108页 |
| ·数据库及分析软件 | 第108页 |
| ·实验方法 | 第108-121页 |
| ·GSUV3-205的驯化培养 | 第108页 |
| ·诱动接合转移载体的构建 | 第108-118页 |
| ·纤维堆囊菌GSUV3-205基因组DNA的提取 | 第108-109页 |
| ·目的片段PCR扩增及后处理 | 第109-112页 |
| ·质粒载体的酶切及连接转化 | 第112-115页 |
| ·接合诱动质粒载体构建流程图 | 第115-118页 |
| ·大肠杆菌之间的接合转移 | 第118页 |
| ·纤维堆囊菌与大肠杆菌间的接合转移 | 第118-119页 |
| ·质粒营救验证接合获得的抗性菌株中质粒的插入位点 | 第119-121页 |
| ·质粒从基因组上的环化 | 第120页 |
| ·环化质粒的测序分析 | 第120-121页 |
| ·实验结果及讨论 | 第121-130页 |
| ·驯化培养获取GSUV3-205液体分散生长突变株 | 第121-122页 |
| ·质粒pCCPA和pCCED的构建 | 第122-124页 |
| ·接合转移菌株的大肠杆菌菌株的构建 | 第124页 |
| ·接合转移获得具有氯霉素抗性的纤维堆囊菌接合子 | 第124-126页 |
| ·质粒营救过程中环化质粒的筛选 | 第126-128页 |
| ·获得的营救质粒的测序及其基因组中插入位点的分析 | 第128-130页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第128-129页 |
| ·测序载体的构建 | 第129-130页 |
| ·测序结果的分析及讨论 | 第130页 |
| ·本章小结 | 第130-133页 |
| 总结与展望 | 第133-135页 |
| 附录 | 第135-141页 |
| 参考文献 | 第141-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第153-154页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第154-155页 |
| 英文论文一 | 第155-185页 |
| 英文论文二 | 第185-197页 |
