人类N-RAS等位基因特异性Taqman Q-PCR的初步研究
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-30页 |
| 1.1 基因测序技术 | 第12-19页 |
| 1.1.1 第一代基因测序 | 第12-14页 |
| 1.1.2 第二代基因测序 | 第14-17页 |
| 1.1.3 第三代基因测序 | 第17-19页 |
| 1.2 基因芯片技术 | 第19-21页 |
| 1.2.1 基因芯片技术原理 | 第19-20页 |
| 1.2.2 基因芯片技术特点 | 第20-21页 |
| 1.2.3 基因芯片技术在肿瘤中的应用 | 第21页 |
| 1.3 荧光原位杂交技术 | 第21-23页 |
| 1.3.1 荧光原位杂交技术的原理 | 第21-22页 |
| 1.3.2 荧光原位杂交技术的特点 | 第22页 |
| 1.3.3 荧光原位杂交技术在肿瘤中的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 PCR技术 | 第23-29页 |
| 1.4.1 传统PCR | 第23-24页 |
| 1.4.2 AS-PCR | 第24-25页 |
| 1.4.3 数字PCR | 第25-26页 |
| 1.4.4 Q-PCR | 第26-29页 |
| 1.5 本课题研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 第2章 提取质粒DNA | 第30-38页 |
| 2.1 实验仪器与试剂耗材 | 第30-32页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第30页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第31-32页 |
| 2.2 质粒构建 | 第32页 |
| 2.3 感受态的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 感受态的转化 | 第33页 |
| 2.4 提取质粒 | 第33页 |
| 2.5 检测质粒浓度 | 第33-34页 |
| 2.5.1 电泳检测浓度 | 第33-34页 |
| 2.5.2 紫外分光光度计检测纯度 | 第34页 |
| 2.5.3 测序验证 | 第34页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第34-38页 |
| 2.6.1 电泳检测结果 | 第34-35页 |
| 2.6.2 紫外分光光度计检测结果 | 第35页 |
| 2.6.3 测序验证结果 | 第35-36页 |
| 2.6.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第3章 单引物反应体系的构建 | 第38-48页 |
| 3.1 实验仪器与试剂 | 第39页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 3.2 PCR引物和Taqman探针的设计 | 第39-40页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第40页 |
| 3.2.2 探针设计 | 第40页 |
| 3.3 单引物荧光定量PCR反应优化 | 第40-42页 |
| 3.3.1 探针浓度的优化 | 第41页 |
| 3.3.2 引物浓度的优化 | 第41页 |
| 3.3.3 模板DNA浓度的优化 | 第41-42页 |
| 3.3.4 确定荧光定量PCR最佳条件 | 第42页 |
| 3.4 单引物验证 | 第42页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第42-48页 |
| 3.5.1 引物及探针序列 | 第42-43页 |
| 3.5.2 单引物PCR反应优化结果 | 第43页 |
| 3.5.3 单引物验证结果 | 第43-44页 |
| 3.5.4 讨论 | 第44-48页 |
| 第4章 多引物反应体系的构建 | 第48-56页 |
| 4.1 实验仪器与试剂 | 第48页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第48页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 4.2 多引物荧光定量PCR反应优化 | 第48-49页 |
| 4.3 多引物验证 | 第49页 |
| 4.4 灵敏度检测 | 第49-50页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 4.5.1 多引物PCR反应优化结果 | 第50-51页 |
| 4.5.2 多引物验证结果 | 第51-52页 |
| 4.5.3 突变点分析灵敏度 | 第52页 |
| 4.5.4 讨论 | 第52-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 在学期间主要学术成果 | 第68页 |
