| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 流感病毒在Vero细胞上的适应性研究 | 第6-21页 |
| 前言 | 第6-9页 |
| 1 实验材料和方法 | 第9-13页 |
| 1.1 实验材料 | 第9-10页 |
| 1.1.1 病毒 | 第9页 |
| 1.1.2 细胞 | 第9页 |
| 1.1.3 主要试剂耗材 | 第9-10页 |
| 1.1.4 仪器和设备 | 第10页 |
| 1.1.5 主要溶液 | 第10页 |
| 1.2 实验方法 | 第10-13页 |
| 1.2.1 Vero细胞培养 | 第10-11页 |
| 1.2.2 MDCK细胞培养 | 第11页 |
| 1.2.3 病毒制备 | 第11页 |
| 1.2.4 流感病毒培养 | 第11页 |
| 1.2.5 血凝滴度的测定 | 第11页 |
| 1.2.6 流感病毒半数感染量(TCID50)滴定 | 第11-12页 |
| 1.2.7 探究各因素对流感病毒产量的影响 | 第12-13页 |
| 2 培养条件优化结果 | 第13-17页 |
| 2.1 病毒毒种TCID50滴定 | 第13页 |
| 2.2 不同pH对流感病毒产量的影响 | 第13-14页 |
| 2.3 不同血清浓度对流感病毒产量的影响 | 第14页 |
| 2.4 不同TPCK胰酶终浓度对流感病毒产量的影响 | 第14-15页 |
| 2.5 不同CPE对流感病毒产量的影响 | 第15-16页 |
| 2.6 不同基础培养基对流感病毒产量的影响 | 第16-17页 |
| 2.7 不同病毒吸附时间对流感病毒产量的影响 | 第17页 |
| 2.8 不同病毒的感染复数(MOI)对流感病毒产量的影响 | 第17页 |
| 3 在细胞工厂上的放大 | 第17-18页 |
| 3.1 细胞工厂上放大Vero细胞 | 第18页 |
| 3.2 细胞工厂上放大流感病毒 | 第18页 |
| 4 结论 | 第18-19页 |
| 5 讨论 | 第19-20页 |
| 6 小结 | 第20-21页 |
| 第二章 Vero细胞培养的流感病毒的纯化处理 | 第21-36页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 7 实验材料 | 第24-25页 |
| 7.1 病毒 | 第24页 |
| 7.2 层析填料 | 第24页 |
| 7.3 仪器与设备 | 第24页 |
| 7.4 主要试剂 | 第24-25页 |
| 7.5 主要溶液 | 第25页 |
| 7.6 耗材 | 第25页 |
| 8 实验方法 | 第25-30页 |
| 8.1 病毒液收获 | 第25页 |
| 8.2 高速离心 | 第25页 |
| 8.3 超滤膜孔径的筛选 | 第25页 |
| 8.4 Benzonase核酸酶与分子筛过滤Sepharose4FF联用 | 第25-28页 |
| 8.4.1 Benzonase核酸酶处理 | 第25-26页 |
| 8.4.2 Benzonase核酸酶的最适工作时间及浓度优化 | 第26页 |
| 8.4.3 分子筛过滤Sepharose4FF纯化 | 第26-28页 |
| 8.5 分子筛过滤柱Sepharose4FF与强阴离子交换柱CaptoQ联用 | 第28-29页 |
| 8.6 流感病毒纯化流程 | 第29-30页 |
| 9 实验结果 | 第30-32页 |
| 9.1 Benzonase核酸酶的最适工作时间及浓度优化 | 第30页 |
| 9.2 超滤膜孔径的筛选结果 | 第30页 |
| 9.3 两种纯化方式纯化结果的对比 | 第30-32页 |
| 10 结果 | 第32-33页 |
| 10.1 纯化工艺的确定 | 第32-33页 |
| 10.2 纯化工艺环节中各项指标检测 | 第33页 |
| 11 检测方法 | 第33-34页 |
| 11.1 血凝效价 | 第33页 |
| 11.2 血凝素含量 | 第33-34页 |
| 11.3 残余宿主细胞(Vero)DNA的检测 | 第34页 |
| 11.4 总蛋白含量 | 第34页 |
| 11.5 感染性滴度 | 第34页 |
| 12 讨论 | 第34-35页 |
| 13 小结 | 第35-36页 |
| 全文小节 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 附录 Ⅰ 缩略语表 | 第40-41页 |
| 附录 Ⅱ 基本实验操作 | 第41-47页 |
| 附录 Ⅲ 溶液配制 | 第47-50页 |
