| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-17页 |
| 一、肿瘤干细胞与癌症 | 第10-12页 |
| (一)肿瘤干细胞假说 | 第10页 |
| (二)肿瘤干细胞的生物学特性 | 第10-11页 |
| (三)肿瘤干细胞表面标记物 | 第11-12页 |
| 二、肿瘤与能量代谢 | 第12-14页 |
| (一)肿瘤细胞的代谢重编程 | 第12-13页 |
| (二)肿瘤细胞中的糖代谢异常 | 第13-14页 |
| 三、GLDC基因的功能与肿瘤 | 第14-16页 |
| (一)GLDC在植物体中的作用 | 第14页 |
| (二)GLDC与非酮性高甘氨酸血症 | 第14-15页 |
| (三)GLDC与肿瘤代谢重编程 | 第15-16页 |
| 四、本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第17-30页 |
| 一、实验仪器和材料 | 第17-20页 |
| (一)实验仪器 | 第17页 |
| (二)实验试剂 | 第17-20页 |
| 二、实验方法 | 第20-30页 |
| (一)GLDC基因启动子的钓取 | 第20-21页 |
| (二)PCR产物及质粒的核酸凝胶电泳 | 第21页 |
| (三)GLDC基因启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第21-23页 |
| (四)碱裂解法提取少量质粒 | 第23页 |
| (五)细胞培养相关实验 | 第23-24页 |
| (六)荧光素酶活性检测 | 第24-25页 |
| (七)基于GLDC启动子活性的化合物筛选 | 第25页 |
| (八)RNA的提取及RT-PCR | 第25-27页 |
| (九)免疫印迹 | 第27页 |
| (十)MTT法检测细胞活力 | 第27页 |
| (十一)乳酸检测 | 第27-28页 |
| (十二)软琼脂克隆形成实验 | 第28页 |
| (十三)流式细胞术检测细胞分子表面标记物 | 第28-29页 |
| (十四)统计学分析 | 第29-30页 |
| 第三部分 实验结果 | 第30-40页 |
| 一、GLDC启动子荧光素酶报告载体的构建及活性鉴定 | 第30-32页 |
| (一)GLDC启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第30-31页 |
| (二)GLDC启动子的活性分析 | 第31-32页 |
| 二、基于GLDC启动子活性的GLDC表达抑制剂筛选 | 第32-34页 |
| (一)GLDC表达抑制剂的初步筛选 | 第32页 |
| (二)GLDC表达抑制剂的复筛 | 第32-33页 |
| (三)阳性化合物对GLDCmRNA水平的影响 | 第33页 |
| (四)TI13和TI102对GLDC蛋白水平的影响 | 第33-34页 |
| 三、TI13、TI102抑制GLDC表达的分子机制研究 | 第34-36页 |
| (一)TI13、TI102对各信号通路的影响 | 第34-35页 |
| (二)TI13、TI102影响相关信号通路的确认 | 第35页 |
| (三)明确ERK/MAPK和AKT信号通路对GLDC表达的调控作用 | 第35-36页 |
| 四、TI13和TI102基于抑制GLDC表达的抗肿瘤作用研究 | 第36-40页 |
| (一)TI13、TI102对肿瘤细胞活力的影响 | 第36-37页 |
| (二)TI13、TI102对肿瘤细胞锚定非依赖性生长能力的的影响 | 第37-38页 |
| (三)TI13、TI102 对 CD44~+的细胞数影响 | 第38页 |
| (四)TI13、TI102对细胞乳酸代谢的影响 | 第38-40页 |
| 第四部分 讨论 | 第40-43页 |
| 一、GLDC启动子的PCR扩增及其报告载体的构建 | 第40页 |
| 二、基于GLDC启动子活性的化合物筛选 | 第40-41页 |
| 三、备选化合物抑制GLDC表达的分子机制研究 | 第41页 |
| 四、备选化合物抗肿瘤作用研究 | 第41-43页 |
| 第五部分 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
