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柑橘无标记转基因技术体系的建立及应用初探

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
第一章 前言第9-21页
 1 课题的提出第9-10页
 2 剔除标记基因的研究进展第10-15页
   ·标记基因的分离剔除法第10-11页
   ·标记基因的重组剔除法第11-13页
     ·转座子系统第11-12页
     ·同源重组第12-13页
     ·位点特异性重组系统第13页
   ·Cre/LoxP系统剔除标记基因的发展过程第13-15页
     ·简单剔除阶段第14页
     ·控制剔除阶段第14-15页
     ·高效剔除阶段第15页
 3 柑橘溃疡病研究进展第15-20页
   ·柑橘溃疡病抗性研究进展第15-17页
     ·不同柑橘种类或品种对溃疡病的抗性第15-16页
     ·柑橘表皮细胞与柑橘溃疡病抗性的研究第16-17页
     ·寄主抗病性与其组织结构及生理生化特性第17页
   ·柑橘溃疡病防治措施的研究现状第17-19页
     ·严格病害检疫措施第18页
     ·化学防治第18页
     ·生物防治第18-19页
   ·抗病基因工程研究进展第19-20页
 4 开展本研究的目的与意义第20-21页
第二章 柑橘无标记转基因转化体系的建立第21-32页
 1 材料与方法第21-25页
   ·材料第21-22页
   ·试验方法第22-25页
     ·材料准备第22页
     ·外植体转化第22-23页
     ·化学诱导剂诱导第23页
     ·诱导抗性芽的嫁接第23页
     ·对照设置第23页
     ·转基因植株的检测第23-25页
 2 结果与分析第25-30页
   ·转化诱导条件对诱导抗性芽生长的影响第25-28页
     ·抗性芽诱导时长度对其生长的影响第25页
     ·6-BA的浓度对诱导抗性芽生长的影响第25-28页
     ·β-雌二醇的浓度对诱导抗性芽生长的影响第28页
   ·标记基因剔除的分析第28-30页
 3 讨论第30-32页
第三章 柑橘溃疡病致病基因pthA-NLS无标记载体的构建第32-41页
 1 材料与方法第32-38页
   ·材料第32-33页
   ·无标记载体的构建第33-37页
     ·质粒小量提取方法第33-35页
     ·回收纯化第35页
     ·去磷酸化第35-36页
     ·外源DNA片段在质粒载体中的克隆第36-37页
   ·p35S-NLS转化农杆菌第37-38页
 2 结果与分析第38-39页
   ·克隆载体pGM-NLS的获得第38页
   ·植物表达载体p35S-NLS的获得第38-39页
 3 讨论第39-41页
第四章 无标记载体对大红甜橙的转化第41-53页
 1 材料与方法第41-45页
   ·材料第41-42页
     ·植物表达载体与植物材料第41页
     ·试剂与仪器第41-42页
     ·主要培养基配方第42页
   ·试验方法第42-45页
     ·农杆菌菌液的准备第42页
     ·植物材料准备第42-43页
     ·外植体的转化第43页
     ·化学诱导剂诱导第43页
     ·诱导抗性芽的嫁接第43页
     ·对照设置第43页
     ·转基因植株的分析检测第43-45页
 2 结果与分析第45-50页
   ·转pthA-NLS基因大红甜橙的获得第45-47页
     ·抗性芽的再生第45页
     ·诱导抗性芽的嫁接第45-47页
     ·诱导抗性芽的生根第47页
   ·转基因植株的检测结果第47-50页
     ·转基因苗的PCR检测结果与分析第47-49页
     ·转基因苗的RT-PCR检测结果与分析第49-50页
 3 讨论第50-53页
第五章 全文总结与展望第53-54页
参考文献第54-59页
附表 缩略词表第59-60页
致谢第60-61页
作者简介第61页

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