| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第14-19页 |
| 2 材料与试剂 | 第19-32页 |
| 2.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 主要耗材及试剂 | 第20-25页 |
| 2.3 抗体 | 第25-27页 |
| 2.4 溶液及缓冲液配制 | 第27-32页 |
| 3 实验方法与原理 | 第32-52页 |
| 3.1 小鼠胚胎组织处理步骤 | 第32页 |
| 3.2 HE染色步骤 | 第32-33页 |
| 3.3 小鼠基因型鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4 分离人脐带静脉内皮细胞HUVECs | 第34-35页 |
| 3.5 HUVECs传代培养 | 第35页 |
| 3.6 HUVECs冻存 | 第35页 |
| 3.7 HUVECs复苏 | 第35-36页 |
| 3.8 分原代小鼠内皮细胞 | 第36页 |
| 3.9 HUVECs免疫荧光 | 第36-37页 |
| 3.10 VE-cadherin内化免疫荧光实验 | 第37-38页 |
| 3.11 EGTA处理HUVECs VE-cadherin内化免疫荧光实验 | 第38-39页 |
| 3.12 SureBeads protein A/G免疫沉淀 | 第39页 |
| 3.13 细胞表面生物素标记实验 | 第39-40页 |
| 3.14 反向生物素标记实验 | 第40页 |
| 3.15 GTP-ARF1/6 Pull Down实验 | 第40-41页 |
| 3.16 内皮细胞通透性实验 | 第41页 |
| 3.17 HUVECs管腔形成实验 | 第41-42页 |
| 3.18 cDNA模板获得及QPCR | 第42-44页 |
| 3.19 质粒的抽提(用于转染细胞) | 第44-45页 |
| 3.20 切胶回收 | 第45页 |
| 3.21 慢病毒病毒包装 | 第45-46页 |
| 3.22 卵黄囊整体包埋染色 | 第46-47页 |
| 3.23 胚胎整体包埋X-gal染色 | 第47-48页 |
| 3.24 孕鼠挽救实验 | 第48页 |
| 3.25 冰冻切片免疫荧光染色 | 第48页 |
| 3.26 石蜡切片免疫荧光 | 第48-49页 |
| 3.27 透射电镜步骤 | 第49-50页 |
| 3.28 xCELLigence高通量分析系统 | 第50-51页 |
| 3.29 统计分析方法 | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-95页 |
| 4.1 SHP2干扰慢病毒穿梭质粒构建 | 第52-53页 |
| 4.2 人脐带静脉内皮细胞HUVECs分离及鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3 抑制SHP2的酶活或者敲降SHP2均能显著增强HUVECs通透性 | 第54-59页 |
| 4.4 内皮细胞缺失SHP2导致VE-cadherin内化 | 第59-67页 |
| 4.5 SHP2缺失导致ARF1激活 | 第67-70页 |
| 4.6 SecinH3阻止SHP2缺失导致的ARF1激活和血管通透性升高 | 第70-73页 |
| 4.7 MET介导SHP2缺失导致的ARF1的激活 | 第73-77页 |
| 4.8 Tie2-Cre驱动的内皮特异Shp2敲除小鼠构建及鉴定 | 第77-78页 |
| 4.9 Shp2敲除小鼠胚胎致死同时伴随严重的弥漫性漏血 | 第78-84页 |
| 4.10 血管内皮Shp2敲除小鼠内皮细胞连接改变 | 第84-87页 |
| 4.11 体内Shp2敲除小鼠胚胎血管新生正常但是体外SHP2敲降影响HUVECs管腔形成 | 第87-90页 |
| 4.12 SecinH3,INCB28060及Crizotinib能挽救Shp2 KO小鼠胚胎漏血表型 | 第90-95页 |
| 5 讨论 | 第95-98页 |
| 6 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 附录 | 第109-117页 |
| 综述 | 第117-134页 |
| 参考文献 | 第127-134页 |
| 作者简介及在读期间所获成果 | 第134页 |
