| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 中英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-35页 |
| 1.1 细胞焦亡 | 第10-18页 |
| 1.1.1 细胞焦亡现象的发现 | 第10-12页 |
| 1.1.2 Caspase-1的激活机制 | 第12-16页 |
| 1.1.3 Caspase-4/5/11的激活机制 | 第16-18页 |
| 1.2 GSDMD | 第18-23页 |
| 1.2.1 GSDMD是细胞焦亡的执行分子 | 第18-20页 |
| 1.2.2 GSDMD是caspase-1/4/5/11的底物 | 第20-21页 |
| 1.2.3 GSDMD的N端结构域具有细胞膜打孔活性 | 第21-23页 |
| 1.3 GSDME | 第23-29页 |
| 1.3.1 Gasdermin家族 | 第23-27页 |
| 1.3.2 GSDME | 第27-29页 |
| 1.4 细胞凋亡 | 第29-35页 |
| 1.4.1 细胞凋亡信号通路 | 第31-32页 |
| 1.4.2 半胱氨酸天冬蛋白酶(caspase) | 第32-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第35页 |
| 1.1.1 细胞系 | 第35页 |
| 1.1.2 野生型小鼠 | 第35页 |
| 1.1.3 Gsdme敲除小鼠 | 第35页 |
| 1.2 实验试剂 | 第35-36页 |
| 1.2.1 实验用药物 | 第35-36页 |
| 1.2.2 重组蛋白 | 第36页 |
| 1.2.3 PCR试剂 | 第36页 |
| 1.2.4 RNA提取及反转录试剂 | 第36页 |
| 1.2.5 流式分析相关试剂 | 第36页 |
| 1.2.6 其它实验相关试剂 | 第36页 |
| 1.3 抗体 | 第36-37页 |
| 1.3.1 Western blot一抗 | 第36-37页 |
| 1.3.2 Wetern blot二抗 | 第37页 |
| 1.4 常用试剂配制 | 第37-38页 |
| 1.4.1 TBS-T缓冲液 | 第37页 |
| 1.4.2 SDS-PAGE电泳缓冲液 | 第37页 |
| 1.4.3 半干转缓冲液 | 第37-38页 |
| 1.4.4 LB培养基(1L) | 第38页 |
| 1.4.5 2X YT培养基(1L) | 第38页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 1.5.1 细胞培养相关仪器 | 第38页 |
| 1.5.2 显微镜 | 第38页 |
| 1.5.3 流式细胞分选仪 | 第38页 |
| 1.5.4 其它常规仪器 | 第38-39页 |
| 1.6 实验方法 | 第39-45页 |
| 1.6.1 Spinning Disk显微镜拍摄 | 第39页 |
| 1.6.2 Western blot | 第39-40页 |
| 1.6.3 大肠杆菌纯化重组蛋白 | 第40-41页 |
| 1.6.4 慢病毒系统制做稳定表达特定基因的细胞系 | 第41页 |
| 1.6.5 体外活性形式的caspases切割蛋白底物 | 第41-42页 |
| 1.6.6 细胞死亡(Cell death)的检测 | 第42页 |
| 1.6.7 细胞存活(Cell survival)的检测 | 第42-43页 |
| 1.6.8 基因敲除细胞系的构建 | 第43-44页 |
| 1.6.9 siRNA介导的基因敲低 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果和分析 | 第45-82页 |
| 3.1 GSDME将caspase-3介导的细胞凋亡转化为细胞焦亡 | 第45-53页 |
| 3.1.1 TNF诱导高表达GSDME的HeLa细胞发生细胞焦亡 | 第45-49页 |
| 3.1.2 化疗药物诱导高表达GSDME的HeLa细胞发生细胞焦亡 | 第49-50页 |
| 3.1.3 caspase-3切割GSDME引发细胞焦亡 | 第50-52页 |
| 3.1.4 GSDME的表达量对细胞焦亡的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 caspase-3可以体外切割GSDME释放其膜打孔活性 | 第53-60页 |
| 3.2.1 caspase-3可以体外切割GSDME | 第53-55页 |
| 3.2.2 GSDME的N端结构域可以结合磷脂 | 第55-56页 |
| 3.2.3 GSDME的N端结构域具有膜打孔活性 | 第56-58页 |
| 3.2.4 GSDME耳聋突变体蛋白可以引起细胞焦亡 | 第58-59页 |
| 3.2.5 GSDME耳聋突变体蛋白在细胞内可以被快速降解 | 第59-60页 |
| 3.3 化疗药物通过激活内源GSDME引起细胞焦亡 | 第60-67页 |
| 3.3.1 化疗药物可以引起高表达GSDME的癌细胞发生细胞焦亡 | 第60-64页 |
| 3.3.2 化疗药物诱导癌细胞焦亡依赖于GSDME | 第64-66页 |
| 3.3.3 化疗药物激活caspase-3切割内源的GSDME | 第66-67页 |
| 3.4 GSDME在肿瘤细胞里被沉默 | 第67-72页 |
| 3.4.1 NCI-60里GSDME的表达情况 | 第67-69页 |
| 3.4.2 化疗药物诱导NCI-H522发生GSDME依赖的细胞焦亡 | 第69-72页 |
| 3.5 化疗药物通过GSDME引起原代细胞焦亡 | 第72-77页 |
| 3.5.1 GSDME在原代细胞里高表达 | 第72-73页 |
| 3.5.2 化疗药物可以引起高表达GSDME的原代细胞发生焦亡 | 第73-75页 |
| 3.5.3 化疗药物可以引起原代细胞内部的GSDME的切割 | 第75-76页 |
| 3.5.4 化疗药物引起原代细胞焦亡依赖于GSDME | 第76-77页 |
| 3.6 caspase-3切割GSDME诱导细胞焦亡在鼠源细胞上保守 | 第77-82页 |
| 3.6.1 大多数鼠源的肿瘤细胞不表达GSDME | 第77页 |
| 3.6.2 GSDME介导的细胞焦亡在鼠源细胞上同样保守 | 第77-80页 |
| 3.6.3 化疗药物引发机体副作用的小鼠模型 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-88页 |
| 4.1 GSDME决定了caspase-3激活之后发生细胞凋亡还是细胞焦亡 | 第82-83页 |
| 4.2 GSDME是化疗副作用的关键分子 | 第83-87页 |
| 4.3 GSDME在提高肿瘤免疫原性的应用 | 第87-88页 |
| 第五章 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 作者简介 | 第100页 |
