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G蛋白偶联受体激酶6(GRK6)的胞核定位机制研究

中文摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
英汉缩略词对照表第11-12页
第一部分:去棕榈酰化修饰下GRK6核定位信号鉴定第12-32页
    前言第12-14页
    1 材料与方法第14-22页
        1.1 主要试剂与设备第14-15页
            1.1.1 主要试剂第14-15页
            1.1.2 主要仪器设备第15页
        1.2 质粒构建第15-17页
            1.2.1 试剂准备第15-16页
            1.2.2 GRK6突变质粒构建第16-17页
        1.3 细胞培养第17页
        1.4 质粒转染第17页
        1.5 稳定细胞株建立第17-18页
        1.6 免疫荧光染色第18页
        1.7 细胞组分分离第18-19页
        1.8 细胞影像分析第19页
        1.9 蛋白免疫印迹第19-21页
            1.9.1 试剂配制及样品准备第19-20页
            1.9.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳第20-21页
        1.10 细胞内钙动员实验第21页
        1.11 统计学分析方法第21-22页
    2 结果第22-29页
        2.1 羧基端的去棕榈酰化修饰促进GRK6胞核转运第22-24页
        2.2 ~(384)PFQQRKKK~(391)为GRK6胞核定位所必需的结构域第24-25页
        2.3 潜在NLS中关键基团的鉴定第25-27页
        2.4 NLS关键基团突变未破坏GRK6的激酶活性第27-29页
    3 讨论第29-31页
    4 结论第31-32页
第二部分:核转运受体介导GRK6胞核转运机制的研究第32-51页
    前言第32-33页
    1 材料与方法第33-45页
        1.1 主要试剂与设备第33-35页
            1.1.1 主要试剂第33-34页
            1.1.2 主要仪器设备第34-35页
        1.2 质粒构建第35-36页
            1.2.1 试剂准备第35页
            1.2.2 双分子荧光互补实验系统的质粒构建第35-36页
        1.3 细胞培养第36页
        1.4 质粒转染第36页
        1.5 稳定细胞株建立第36-37页
        1.6 基因沉默第37-39页
            1.6.1 小片段干扰RNA的准备第37页
            1.6.2 siRNA转染步骤第37页
            1.6.3 siRNA沉默效果验证第37-39页
        1.7 免疫荧光染色第39-40页
        1.8 总RNA提取第40页
        1.9 逆转录步骤及体系第40-41页
        1.10 PCR第41页
        1.11 蛋白免疫印迹第41-43页
            1.11.1 试剂配制及样品准备第41-42页
            1.11.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳第42-43页
        1.12 双分子荧光互补实验(BiFC)第43页
        1.13 免疫共沉淀(Co-IP)第43-45页
    2 结果第45-49页
        2.1 Importin-11 介导GRK6胞核转运第45-47页
        2.2 Importin-11 与GRK6存在相互作用第47-49页
    3 讨论第49-50页
    4 结论第50-51页
参考文献第51-54页
附录(综述)第54-66页
    参考文献第61-66页
攻读学位期间发表的学术论文目录第66-67页
致谢第67页

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