中文摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
英汉缩略词对照表 | 第11-12页 |
第一部分:去棕榈酰化修饰下GRK6核定位信号鉴定 | 第12-32页 |
前言 | 第12-14页 |
1 材料与方法 | 第14-22页 |
1.1 主要试剂与设备 | 第14-15页 |
1.1.1 主要试剂 | 第14-15页 |
1.1.2 主要仪器设备 | 第15页 |
1.2 质粒构建 | 第15-17页 |
1.2.1 试剂准备 | 第15-16页 |
1.2.2 GRK6突变质粒构建 | 第16-17页 |
1.3 细胞培养 | 第17页 |
1.4 质粒转染 | 第17页 |
1.5 稳定细胞株建立 | 第17-18页 |
1.6 免疫荧光染色 | 第18页 |
1.7 细胞组分分离 | 第18-19页 |
1.8 细胞影像分析 | 第19页 |
1.9 蛋白免疫印迹 | 第19-21页 |
1.9.1 试剂配制及样品准备 | 第19-20页 |
1.9.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第20-21页 |
1.10 细胞内钙动员实验 | 第21页 |
1.11 统计学分析方法 | 第21-22页 |
2 结果 | 第22-29页 |
2.1 羧基端的去棕榈酰化修饰促进GRK6胞核转运 | 第22-24页 |
2.2 ~(384)PFQQRKKK~(391)为GRK6胞核定位所必需的结构域 | 第24-25页 |
2.3 潜在NLS中关键基团的鉴定 | 第25-27页 |
2.4 NLS关键基团突变未破坏GRK6的激酶活性 | 第27-29页 |
3 讨论 | 第29-31页 |
4 结论 | 第31-32页 |
第二部分:核转运受体介导GRK6胞核转运机制的研究 | 第32-51页 |
前言 | 第32-33页 |
1 材料与方法 | 第33-45页 |
1.1 主要试剂与设备 | 第33-35页 |
1.1.1 主要试剂 | 第33-34页 |
1.1.2 主要仪器设备 | 第34-35页 |
1.2 质粒构建 | 第35-36页 |
1.2.1 试剂准备 | 第35页 |
1.2.2 双分子荧光互补实验系统的质粒构建 | 第35-36页 |
1.3 细胞培养 | 第36页 |
1.4 质粒转染 | 第36页 |
1.5 稳定细胞株建立 | 第36-37页 |
1.6 基因沉默 | 第37-39页 |
1.6.1 小片段干扰RNA的准备 | 第37页 |
1.6.2 siRNA转染步骤 | 第37页 |
1.6.3 siRNA沉默效果验证 | 第37-39页 |
1.7 免疫荧光染色 | 第39-40页 |
1.8 总RNA提取 | 第40页 |
1.9 逆转录步骤及体系 | 第40-41页 |
1.10 PCR | 第41页 |
1.11 蛋白免疫印迹 | 第41-43页 |
1.11.1 试剂配制及样品准备 | 第41-42页 |
1.11.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-43页 |
1.12 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第43页 |
1.13 免疫共沉淀(Co-IP) | 第43-45页 |
2 结果 | 第45-49页 |
2.1 Importin-11 介导GRK6胞核转运 | 第45-47页 |
2.2 Importin-11 与GRK6存在相互作用 | 第47-49页 |
3 讨论 | 第49-50页 |
4 结论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-54页 |
附录(综述) | 第54-66页 |
参考文献 | 第61-66页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
致谢 | 第67页 |