| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 文献回顾 | 第15-24页 |
| 实验一 小鼠RANKL基因的克隆 | 第24-35页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第24-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第25页 |
| 1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-30页 |
| 2.1 骨髓细胞总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2 反转录合成c DNA | 第26-27页 |
| 2.3 m RANKL胞外段基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.4 p ET28a-m RANKL重组表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.5 p ET28a-m RANKL重组表达载体的转化 | 第28-29页 |
| 2.6 菌液PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.7 重组表达质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| 2.8 p ET28a- p NO2Phe~（234）m RANKL重组表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-33页 |
| 3.1 骨髓细胞总RNA的提取及小鼠RANKL基因胞外段的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.2 野生型m RANKL重组表达载体（p ET28a-m RANKL）的构建 | 第31-33页 |
| 3.3 p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL（p ET28a- p NO2Phe234m RANKL）重组表达载体的构建 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 实验二p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL的原核表达与纯化 | 第35-46页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第35-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| 1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-40页 |
| 2.1 p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| 2.2 SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| 2.3 Western Blot | 第38页 |
| 2.4 重组蛋白的纯化 | 第38页 |
| 2.5 高效液相色谱联合质谱检测 | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| 3.1 p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL的原核表达 | 第40-41页 |
| 3.2 p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL的纯化 | 第41-42页 |
| 3.3 纯化蛋白的质谱鉴定 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 实验三 小鼠免疫及抗m RANKL抗血清检测 | 第46-51页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-48页 |
| 2.1 小鼠免疫 | 第47页 |
| 2.2 抗血清的制备 | 第47页 |
| 2.3 间接ELISA法检测抗血清抗体效价 | 第47-48页 |
| 2.4 Western Blot检测抗血清活性 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-50页 |
| 3.1 小鼠免疫及抗m RANKL抗血清滴度检测 | 第48-49页 |
| 3.2 抗血清活性分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 个人简历和研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
