| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一章 前期工作基础 | 第17-24页 |
| 第二章 miR-152在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达 | 第24-43页 |
| 1 实验材料 | 第24-31页 |
| 1.1 组织标本 | 第24页 |
| 1.2 细胞株 | 第24页 |
| 1.3 主要实验设备 | 第24-25页 |
| 1.4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第26-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.1 原位杂交检测 | 第31-33页 |
| 2.2 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.3 qRT-PCR检测miR-152的表达 | 第34-37页 |
| 2.4 统计学处理 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| 3.1 原位杂交方法检测胃癌组织中miR-152的表达 | 第38页 |
| 3.2 qRT-PCR的方法检测胃癌组织中miR-152的表达 | 第38-40页 |
| 3.3 miR-152在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达 | 第40-42页 |
| 4 结论 | 第42-43页 |
| 第三章 miR-152对人类胃癌细胞株生物行为的影响 | 第43-58页 |
| 1 实验材料 | 第43-45页 |
| 1.1 细胞株 | 第43页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第43-44页 |
| 1.3 主要试剂 | 第44页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-49页 |
| 2.1 细胞培养 | 第45-47页 |
| 2.2 细胞转染 | 第47页 |
| 2.3 细胞中小RNA的提取和质量判断 | 第47-48页 |
| 2.4 qRT-PCR检测分析miR-152 | 第48页 |
| 2.5 细胞增殖能力的检测（MTT比色法） | 第48页 |
| 2.6 软琼脂集落形成实验 | 第48页 |
| 2.7 Transwell侵袭实验 | 第48-49页 |
| 2.8 统计学处理 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-57页 |
| 3.1 转染效率检测 | 第49-50页 |
| 3.2 miR-152高表达对胃癌细胞增殖力的抑制 | 第50-51页 |
| 3.3 miR-152高表达对胃癌细胞侵袭力的抑制 | 第51页 |
| 3.4 miR-152 mimic的有效作用时间检测 | 第51-54页 |
| 3.5 miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力的影响 | 第54-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 第四章 DNMTs家族在胃癌中的表达 | 第58-79页 |
| 1 实验材料 | 第58-62页 |
| 1.1 组织标本 | 第58页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58-59页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第59-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-70页 |
| 2.1 免疫组化检测DNMTs在胃癌组织中的表达 | 第62-63页 |
| 2.2 细胞培养 | 第63-65页 |
| 2.3 qRT-PCR检测DNMTs mRNA | 第65-67页 |
| 2.4 Werstern Blot检测DNMTs蛋白表达 | 第67-70页 |
| 2.5 统计学处理 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-77页 |
| 3.1 DNMTs在胃癌组织中的表达 | 第70页 |
| 3.2 DNMTs在胃癌细胞中的表达 | 第70-76页 |
| 3.3 胃癌组织中DNMT1表达与miR-152表达相关性分析 | 第76页 |
| 3.4 胃癌细胞株DNMT1表达与miR-152表达相关性分析 | 第76-77页 |
| 4 结论 | 第77-79页 |
| 第五章 miR-152和DNMT1的靶向关系分析 | 第79-94页 |
| 1 实验材料 | 第79-83页 |
| 1.1 细胞株 | 第79页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第79页 |
| 1.3 主要试剂 | 第79-80页 |
| 1.4 主要配制试剂 | 第80-83页 |
| 2 实验方法 | 第83-90页 |
| 2.1 脂质体细胞转染 | 第83-84页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR检测转染细胞的miR-152表达水平 | 第84页 |
| 2.3 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA | 第84-86页 |
| 2.4 荧光素酶报告基因载体的构建 | 第86页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因分析 | 第86-87页 |
| 2.6 Western Blot蛋白印迹 | 第87-89页 |
| 2.7 统计学处理 | 第89-90页 |
| 3 结果 | 第90-93页 |
| 3.1 miR-152靶基因的预测 | 第90页 |
| 3.2 荧光素酶报告基因分析 | 第90-93页 |
| 4 结论 | 第93-94页 |
| 第六章 DNMT1逆转miR-152对胃癌细胞生物行为的影响 | 第94-112页 |
| 1 实验材料 | 第94-99页 |
| 1.1 细胞株 | 第94页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第94-95页 |
| 1.3 主要试剂 | 第95页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第95-99页 |
| 2 实验方法 | 第99-102页 |
| 2.1 质粒构建 | 第99页 |
| 2.2 细胞的慢病毒感染 | 第99页 |
| 2.3 脂质体细胞转染 | 第99-100页 |
| 2.4 转染效率的PCR检测 | 第100页 |
| 2.5 细胞中总RNA的提取 | 第100页 |
| 2.6 qRT-PCR定量分析miR-152 | 第100-101页 |
| 2.7 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA | 第101页 |
| 2.8 Western Blot蛋白印迹qRT-PCR | 第101页 |
| 2.9 细胞增殖能力的检测 | 第101页 |
| 2.10 软琼脂集落形成实验 | 第101页 |
| 2.11 Transwell侵袭实验 | 第101-102页 |
| 2.12 统计学处理 | 第102页 |
| 3 实验结果 | 第102-110页 |
| 3.1 转染效率的检测 | 第102-103页 |
| 3.2 DNMT1 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞增殖能力的影响 | 第103-107页 |
| 3.3 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞侵袭能力的影响 | 第107-109页 |
| 3.4 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力 | 第109-110页 |
| 4 结论 | 第110-112页 |
| 总结 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-118页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
