| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-6页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 实验材料与方法 | 第13-32页 |
| 1.1 实验原料 | 第13页 |
| 1.2 仪器设备 | 第13-14页 |
| 1.3 实验试剂和材料 | 第14-16页 |
| 1.3.1 实验试剂 | 第14-15页 |
| 1.3.2 试剂的配置 | 第15-16页 |
| 1.3.3 实验材料 | 第16页 |
| 1.4 细胞培养 | 第16-17页 |
| 1.4.1 细胞的复苏 | 第16页 |
| 1.4.2 细胞的传代 | 第16-17页 |
| 1.4.3 细胞的冻存 | 第17页 |
| 1.5 探讨CREM沉默对Catsper1 mRNA和蛋白表达量的影响 | 第17-23页 |
| 1.5.1 CREMshRNA慢病毒载体的构建 | 第17页 |
| 1.5.2 慢病毒转染细胞与CREM-shRNA筛选 | 第17-18页 |
| 1.5.3 CREM基因沉默对GC-2spd细胞Catsper1、ACT、CBP mRNA表达的影响 | 第18-20页 |
| 1.5.4 CREM基因沉默对GC-2spd细胞Catsper1、ACT、CBP蛋白表达的影响 | 第20-23页 |
| 1.6 探讨CREM转录因子能否与Catsper1启动子序列结合--EMSA实验 | 第23-28页 |
| 1.6.1 Catsper1启动子区序列转录因子结合位点的位置及覆盖CRE位点的探针序列 | 第23-24页 |
| 1.6.2 生物素标记探针 | 第24-25页 |
| 1.6.3 核蛋白的提取 | 第25页 |
| 1.6.4 核蛋白浓度的测定 | 第25页 |
| 1.6.5 EMSA结合反应—探针与核蛋白的结合 | 第25-26页 |
| 1.6.6 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶的配置 | 第26-27页 |
| 1.6.7 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27页 |
| 1.6.8 转膜 | 第27页 |
| 1.6.9 紫外胶联 | 第27页 |
| 1.6.10 化学发光法检测生物素标记的探针 | 第27-28页 |
| 1.7 探讨CREM-CBP二聚体抑制剂对Catsper1、CREM、CBP mRNA和蛋白表达量的影响 | 第28页 |
| 1.7.1 CREM-CBP二聚体抑制剂对GC-2spd细胞中Catsper1、CREM、CBP mRNA表达的影响 | 第28页 |
| 1.7.2 CREM-CBP二聚体抑制剂对GC-2spd细胞中Catsper1、CREM、CBP蛋白表达的影响 | 第28页 |
| 1.8 细胞实验设计路线 | 第28页 |
| 1.9 药品的制备 | 第28-29页 |
| 1.10 动物处理 | 第29-30页 |
| 1.11 标本采集 | 第30页 |
| 1.12 检测“促育生精方”对小鼠精子数目和活力的影响 | 第30-31页 |
| 1.12.1 精子计数 | 第30页 |
| 1.12.2 精子活力的检测 | 第30-31页 |
| 1.13 “促育生精方”对小鼠睾丸中ACT, CREM, Catsper1 mRNA表达量的影响 | 第31页 |
| 1.14 “促育生精方”对小鼠睾丸中ACT,CREM,Catsper1蛋白表达量的影响 | 第31页 |
| 1.15 动物实验设计路线 | 第31页 |
| 1.16 统计学分析 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-53页 |
| 2.1 CREM沉默对Catsper1、ACT和CBP mRNA和蛋白表达量的影响 | 第32-39页 |
| 2.1.1 慢病毒转染GC-2spd细胞最适转染浓度的筛选 | 第32页 |
| 2.1.2 CREMshRNA的筛选 | 第32-35页 |
| 2.1.3 CREM沉默后Catsper1,ACT,CBP mRNA及蛋白的表达情况 | 第35-39页 |
| 2.2 CREM转录因子可与Catsper1启动子区CRE位点体外结合 | 第39-40页 |
| 2.3 CREM-CBP二聚体抑制剂对Catsepr1、CREM、CBP mRNA及蛋白表达量的影响 | 第40-45页 |
| 2.4 探讨“促育生精方”治疗小鼠不育症的效果及其机理 | 第45-53页 |
| 2.4.1 “促育生精方”对小鼠睾丸质量及精子活力的影响 | 第45-48页 |
| 2.4.2 “促育生精方”对少弱精症小鼠睾丸中ACT, CREM, Catsper1 mRNA表达量的影响 | 第48-50页 |
| 2.4.3 “促育生精方”对ACT,CREM,Catsper1蛋白表达量的影响 | 第50-53页 |
| 讨论 | 第53-59页 |
| 3.1 细胞的选择 | 第53页 |
| 3.2 CREM沉默对Catsper1 mRNA和蛋白质表达量的影响 | 第53-54页 |
| 3.3 CREM沉默对ACT、CBP mRNA和蛋白质表达量的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 CREM转录因子与Catsper1启动子区CRE位点体外结合反应 | 第55-56页 |
| 3.5 CREM-CBP二聚体抑制剂对Catsper1、CREM、CBP mRNA和蛋白质表达量的影响 | 第56页 |
| 3.6 “促育生精方”的组成与制备工艺 | 第56-57页 |
| 3.7 少弱精症小鼠模型的构建 | 第57页 |
| 3.8 “促育生精方”对小鼠精子密度和精子活力的影响 | 第57-58页 |
| 3.9 “促育生精方”对小鼠睾丸中ACT, CREM, Catsper1 mRNA和蛋白质表达量的影响 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 综述 | 第63-83页 |
| 综述参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
