| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 DGAT1基因介绍 | 第12-15页 |
| 1.1 DGAT1基因功能的相关介绍 | 第12-15页 |
| 1.1.1 DGAT1与骨骼肌的关系 | 第12-13页 |
| 1.1.2 DGAT1与肌内脂肪关系 | 第13页 |
| 1.1.3 DGAT1与能量消耗的关系 | 第13-14页 |
| 1.1.4 DGAT1与其他器官组织的关系 | 第14-15页 |
| 1.2 DGAT1基因的应用以及发展前景 | 第15页 |
| 2 CRISPR/Cas9系统介绍 | 第15-21页 |
| 2.1 CRISPR/CAS系统的历史背景 | 第16页 |
| 2.2 CRISPR/Cas系统的分类及功能 | 第16-17页 |
| 2.3 CRSPRCas9的工作原理 | 第17页 |
| 2.4 CRISPRCAS9系统的问题及改进 | 第17-18页 |
| 2.5 CRISPRCAS9系统的未来发展及最新应用 | 第18-21页 |
| 2.5.1 CRISPRCas9系统在医学领域中的应用 | 第19页 |
| 2.5.2 CRISPRCas9系统在基因工程中的应用 | 第19-21页 |
| 第二章 利用显微注射方法构建DGAT1过表达转基因小鼠 | 第21-54页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.3 配制试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 动物材料 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 sgRNA载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.2 同源重组载体构建 | 第24-26页 |
| 2.2.3 构建载体的功能验证 | 第26-28页 |
| 2.2.4 转基因小鼠的制备 | 第28-31页 |
| 2.2.5 转基因小鼠的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.6 转基因小鼠DGAT1基因的表达检测 | 第31-35页 |
| 3 结果 | 第35-51页 |
| 3.1 Cas9/sgRNA载体的构建 | 第35页 |
| 3.2 同源重组载体的构建 | 第35-43页 |
| 3.2.1 目的基因的获取 | 第35-36页 |
| 3.2.2 MCK核心启动子的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 上游同源臂的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 目的基因与PMPR载体的连接鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.5 MCK核心启动子与PMDPR载体的连接鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.6 上游同源臂与PMCDPR载体的连接鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.7 同源重组载体的酶切鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3 载体的功能验证 | 第43-45页 |
| 3.3.1 C2C12细胞的培养 | 第43页 |
| 3.3.2 同源重组载体的功能验证 | 第43-45页 |
| 3.4 转基因小鼠的制备 | 第45-47页 |
| 3.4.1 原核注射的结果 | 第45-46页 |
| 3.4.2 转基因小鼠的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5 转基因小鼠表达水平上的检测 | 第47-49页 |
| 3.5.1 实时定量PCR检测结果 | 第47-48页 |
| 3.5.2 WesternBlot检测结果 | 第48-49页 |
| 3.6 转基因小鼠表型检测 | 第49-51页 |
| 3.6.1 转基因小鼠肌肉甘油三酯与脂肪酸的测定 | 第49-50页 |
| 3.6.2 转基因小鼠不同周龄体重 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
