| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 蓝莓 | 第9页 |
| 1.3 植物菌根真菌的研究概况 | 第9-12页 |
| 1.3.1 菌根 | 第9-10页 |
| 1.3.2 菌根的分类及特征 | 第10页 |
| 1.3.3 菌根的生物学作用 | 第10-11页 |
| 1.3.4 菌根真菌及其物种多样性 | 第11页 |
| 1.3.5 菌根真菌的定殖 | 第11-12页 |
| 1.3.6 影响菌根真菌的定殖的因素 | 第12页 |
| 1.4 绿色荧光蛋白在真菌中的应用研究 | 第12-13页 |
| 1.4.1 绿色荧光蛋白 | 第12页 |
| 1.4.2 绿色荧光蛋白作为标记物的优点 | 第12-13页 |
| 1.4.3 GFP标记微生物在植物体内定殖的研究 | 第13页 |
| 1.5 地高辛标记原位杂交的原理及应用 | 第13-14页 |
| 1.5.1 地高辛标记原位杂交的原理 | 第13页 |
| 1.5.2 地高辛标记原位杂交的应用 | 第13-14页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第14-15页 |
| 2 大兴安岭蓝莓菌根真菌分离鉴定 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 蓝莓菌根材料及采集地情况 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基 | 第15页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 菌根真菌的分离 | 第16页 |
| 2.2.2 菌根真菌初步分类 | 第16-17页 |
| 2.2.3 CTAB法提取菌根真菌基因组DNA | 第17页 |
| 2.2.4 PCR获得菌根真菌基因组ITS段 | 第17-18页 |
| 2.2.5 PCR产物的测序及序列分析 | 第18页 |
| 2.3 结果与分析 | 第18-22页 |
| 2.3.1 蓝莓菌根真菌的分离 | 第18-19页 |
| 2.3.2 菌根真菌的分子生物学鉴定 | 第19-22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-23页 |
| 2.5 本章小结 | 第23-24页 |
| 3 农杆菌介导菌根真菌GFP标记遗传转化 | 第24-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 菌株 | 第24页 |
| 3.1.2 质粒 | 第24-25页 |
| 3.2 仪器和试剂 | 第25-27页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第25页 |
| 3.2.2 试剂和培养基 | 第25-27页 |
| 3.3 方法 | 第27-32页 |
| 3.3.1 GFP表达盒的扩增 | 第27页 |
| 3.3.2 GFP表达盒的克隆鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3.3 质粒pCAMBIA1300的双酶切 | 第28页 |
| 3.3.4 重组质粒pCEH-GFP的获得与酶切鉴定 | 第28页 |
| 3.3.5 HYG表达盒的酶切与测序鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3.6 表达载体pXBtCEH-GFP的构建 | 第29-30页 |
| 3.3.7 菌根真菌潮霉素抗性的检测 | 第30页 |
| 3.3.8 农杆菌的电击转化 | 第30-31页 |
| 3.3.9 根癌农杆菌介导遗传转化 | 第31-32页 |
| 3.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 3.4.1 GFP表达原件的扩增 | 第32页 |
| 3.4.2 pEASY-GFP的构建及验证 | 第32-33页 |
| 3.4.3 pCEH-GFP的构建及验证 | 第33页 |
| 3.4.4 HYG表达盒的酶切及测序验证 | 第33-34页 |
| 3.4.5 pXBtCEH-GFP的构建及验证 | 第34页 |
| 3.4.6 hygB对菌根真菌生长的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.7 农杆菌转化子验证 | 第35页 |
| 3.4.8 菌根真菌转化子获得及菌丝荧光观察 | 第35页 |
| 3.4.9 菌根真菌转化子验证 | 第35-38页 |
| 3.5 讨论 | 第38页 |
| 3.6 本章小结 | 第38-39页 |
| 4 蓝莓菌根真菌定殖情况初探 | 第39-47页 |
| 4.1 材料和仪器试剂 | 第39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 菌根真菌侵染蓝莓无菌组培苗 | 第39-40页 |
| 4.2.2 PCR法制备地高辛标记探针 | 第40页 |
| 4.2.3 斑点杂交验证探针有效性 | 第40-41页 |
| 4.2.4 蓝莓菌根冰冻切片的制作 | 第41页 |
| 4.2.5 冰冻切片的固定 | 第41页 |
| 4.2.6 冰冻切片的消化 | 第41页 |
| 4.2.7 原位PCR放大信号 | 第41-42页 |
| 4.2.8 杂交 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 4.3.1 探针制备 | 第42页 |
| 4.3.2 斑点杂交验证探针有效性 | 第42-43页 |
| 4.3.3 蓝莓须根组织冰冻切片的杂交结果 | 第43-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46页 |
| 4.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |