| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 植物CA~(2+)研究进展及研究羊草CA~(2+)吸收、分布的意义 | 第14-29页 |
| 1 植物钙研究进展 | 第14-27页 |
| 1.1 植物中Ca~(2+)的吸收和运输 | 第14-15页 |
| 1.2 植物中的钙主要储存在液泡、内质网和质外体 | 第15页 |
| 1.3 Ca~(2+)作为结构分子在植物生长发育过程中起重要作用 | 第15-18页 |
| 1.3.1 Ca~(2+)和细胞壁的硬度 | 第16页 |
| 1.3.2 Ca~(2+)和细胞质膜的通透性 | 第16-18页 |
| 1.4 Ca~(2+)作为信号分子在植物生长发育过程中起重要作用 | 第18-27页 |
| 1.4.1 特异性Ca~(2+)信号 | 第18-19页 |
| 1.4.2 Ca~(2+)信号的解码 | 第19-22页 |
| 1.4.3 Ca~(2+)的内流 | 第22-25页 |
| 1.4.4 Ca~(2+)的外流 | 第25-27页 |
| 2 研究羊草Ca~(2+)吸收、分布的意义 | 第27-29页 |
| 2.1 全球范围内表层土壤植物可利用Ca~(2+)在减少 | 第27页 |
| 2.2 羊草中Ca~(2+)的吸收及分布还未见报道 | 第27-29页 |
| 第二章 羊草CA~(2+)依赖生长机理及特有组氨酸富集CA~(2+)结合蛋白功能研究 | 第29-131页 |
| 1.引言 | 第29-30页 |
| 2.材料和方法 | 第30-79页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-47页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.1.2 菌种 | 第30页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.4 相关试剂及溶液的配制 | 第31-44页 |
| 2.1.5 相关引物信息 | 第44-47页 |
| 2.2 实验方法及原理 | 第47-79页 |
| 2.2.1 羊草种子最佳无菌发芽条件的探究 | 第47页 |
| 2.2.2 羊草瞬时表达实验体系的建立 | 第47-48页 |
| 2.2.3 羊草不同培养基上生长的生理学分析 | 第48页 |
| 2.2.4 细胞学染料染色实验及免疫荧光实验 | 第48-50页 |
| 2.2.5 转录组测序实验 | 第50页 |
| 2.2.6 LcHRC1基因全长的克隆实验 | 第50-58页 |
| 2.2.7 LcHRC1蛋白短肽离子结合特性分析 | 第58-60页 |
| 2.2.8 DH5α大肠杆菌感受态制备 | 第60页 |
| 2.2.9 GV3101/C58C1农杆菌感受态制备 | 第60-61页 |
| 2.2.10 Y187/Y2HGold酵母感受态制备 | 第61-62页 |
| 2.2.11 表达载体的构建 | 第62-68页 |
| 2.2.12 表达载体质粒转化农杆菌感受态 | 第68-69页 |
| 2.2.13 表达载体质粒转化酵母感受态 | 第69页 |
| 2.2.14 酵母双杂交实验 | 第69-73页 |
| 2.2.15 蛋白的亚细胞定位实验 | 第73-74页 |
| 2.2.16 获取转LcHRC1基因拟南芥材料 | 第74-75页 |
| 2.2.17 拟南芥不同培养基上生长的生理学分析 | 第75页 |
| 2.2.18 拟南芥干旱处理实验 | 第75页 |
| 2.2.19 监测拟南芥材料叶[Ca~(2+)]cyt瞬时变化实验 | 第75-77页 |
| 2.2.20 半定量及定量实验 | 第77-78页 |
| 2.2.21 拟南芥ABA含量测定 | 第78-79页 |
| 3.结果与分析 | 第79-124页 |
| 3.1 羊草种子最佳无菌发芽条件为5%NaClO+0.1%Triton-X100消毒2h后避光发芽 | 第79-83页 |
| 3.1.1 5%NaClO+0.1%TritonX-100是羊草种子首选消毒剂 | 第79-81页 |
| 3.1.2 5%NaClO+0.1%Triton-X100消毒完整羊草种子的最佳时间为2h | 第81-83页 |
| 3.2 农杆菌成功介导红色荧光蛋白基因在羊草叶片表达 | 第83-85页 |
| 3.3 低Ca~(2+)特异性诱导羊草主根伸长 | 第85-89页 |
| 3.4 细胞学染料染色实验证明低Ca~(2+)诱导羊草根积累H2O2和TAG | 第89-92页 |
| 3.5 低浓度H2O2诱导羊草主根伸长,抑制羊草根毛生长 | 第92-94页 |
| 3.6 转录组测序实验探究低Ca~(2+)特异性诱导羊草主根伸长的分子机理 | 第94-96页 |
| 3.7 免疫荧光实验证明低Ca~(2+)培养基上生长的羊草根半纤维素含量增加 | 第96-98页 |
| 3.8 羊草特有Ca~(2+)结合蛋白的分析 | 第98-99页 |
| 3.9 LcHRC1基因全长的克隆及组织特异性表达分析 | 第99-102页 |
| 3.9.1 LcHRC1基因编码区序列没有内含子 | 第99-100页 |
| 3.9.2 LcHRC1基因启动子区有CpG岛元件,启动LcHRC1在羊草叶片、根中表达 | 第100-102页 |
| 3.10 LcHRC1蛋白片段有Ca~(2+)和Zn2+结合特性 | 第102-107页 |
| 3.11 酵母双杂交实验证明拟南芥AtTPM1蛋白与LcHRC1蛋白相互作用 | 第107-112页 |
| 3.11.1 LcHRC1蛋白对酵母菌Y2HGold的生长没有毒性 | 第108页 |
| 3.11.2 LcHRC1蛋白不能自激活报告基因的表达 | 第108-109页 |
| 3.11.3 酵母筛库实验证明拟南芥AtTPM1蛋白可能与LcHRC1蛋白相互作用 | 第109-110页 |
| 3.11.4 酵母双杂交实验证明拟南芥AtTPM1蛋白确实与LcHRC1蛋白相互作用 | 第110-112页 |
| 3.12 羊草LcTPM1蛋白与LcHRC1蛋白相互作用 | 第112-113页 |
| 3.13 LcHRC1蛋白定位在细胞核 | 第113-115页 |
| 3.13.1 LcHRC1-GFP融合蛋白在烟草叶片细胞核表达 | 第114页 |
| 3.13.2 LcHRC1-GFP融合蛋白在羊草叶片细胞核表达 | 第114-115页 |
| 3.14 LcHRC1互作蛋白LcTPM1定位在细胞核 | 第115-116页 |
| 3.15 转LcHRC1基因拟南芥的生长对ABA敏感 | 第116-118页 |
| 3.16 LcHRC1不参与ABA代谢 | 第118页 |
| 3.17 LcHRC1参与ABA依赖信号通路 | 第118-120页 |
| 3.18 LcHRC1参与ABA依赖信号通路对干旱胁迫的应答 | 第120-121页 |
| 3.19 ABA处理拟南芥叶片转LcHRC1基因拟南芥[Ca~(2+)]cyt升高倍数低于野生型 | 第121-123页 |
| 3.20 ABA抑制羊草叶片中LcHRC1基因的表达 | 第123-124页 |
| 4.讨论 | 第124-129页 |
| 5.结论 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-147页 |
| 附录 | 第147-155页 |
| 附录一：英文缩略词 | 第147-148页 |
| 附录二：羊草转录组测序数据分析到的Ca~(2+)结合蛋白及其相关蛋白统计 | 第148-151页 |
| 附录三：LcHRC1基因侧翼未知序列及LcHRC1基因序列 | 第151-155页 |
| 致谢 | 第155-157页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第157页 |
