| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 丹参水溶性酚酸类有效成分 | 第11-12页 |
| 1.2 迷迭香酸的内源途径 | 第12-15页 |
| 1.2.1 迷迭香酸的代谢通路 | 第12-14页 |
| 1.2.2 酪氨酸代谢支路相关基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 2A序列构建多基因共表达载体 | 第15-17页 |
| 1.3.1 多基因载体构建策略 | 第15-16页 |
| 1.3.2 采用2A序列的构建策略 | 第16-17页 |
| 1.4 植物蛋白酵母体系异源表达 | 第17-20页 |
| 1.4.1 酵母真核表达体系 | 第17-18页 |
| 1.4.2 异源合成植物次生代谢产物 | 第18-20页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第20-23页 |
| 第2章 酪氨酸支路相关基因的克隆以及单表达载体构建 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂和药品 | 第23页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 丹参总RNA的抽提与反转录 | 第24页 |
| 2.2.2 SmTAT、SmHPPR和SmRAS的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.3 SmHPPR和SmRAS单表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第27-28页 |
| 2.3.1 SmTAT、SmHPPR和SmRAS的克隆 | 第27页 |
| 2.3.2 SmHPPR和SmRAS单表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-31页 |
| 第3章 单表达载体的酵母转化和蛋白的诱导表达 | 第31-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂和药品 | 第31-32页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 酵母异源单表达载体转化 | 第33-34页 |
| 3.2.2 重组酵母菌株的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.3 蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| 3.2.4 蛋白的诱导表达条件优化 | 第35-36页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE检测蛋白 | 第36页 |
| 3.2.6 蛋白的提取纯化 | 第36-37页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第37-42页 |
| 3.3.1 电击参数的选择 | 第37页 |
| 3.3.2 pPICZαA空载、SmHPPR和SmRAS单表达酵母菌株的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.3 SmHPPR蛋白的诱导表达和纯化 | 第38-41页 |
| 3.3.4 SmRAS蛋白的诱导表达和纯化 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第4章 SmHPPR体外活性研究 | 第45-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第45页 |
| 4.1.2 试剂和药品 | 第45页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 酶液制备 | 第45页 |
| 4.2.2 SmHPPR蛋白活性检测样品的制备 | 第45-46页 |
| 4.2.3 色谱条件 | 第46页 |
| 4.2.4 精密度 | 第46页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第46-48页 |
| 4.3.1 SmHPPR体外功能分析 | 第46-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第5章 半合成迷迭香酸工程菌的初步构建 | 第49-71页 |
| 5.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第49页 |
| 5.1.2 试剂和药品 | 第49页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第49-50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-63页 |
| 5.2.0 SmTAT、SmHPPR和SmRAS共表达载体的构建(三表达框法) | 第50-57页 |
| 5.2.1 SmTAT、SmHPPR和SmRAS共表达载体的构建(T2A法) | 第57-62页 |
| 5.2.2 酵母异源三基因共表达载体转化 | 第62页 |
| 5.2.3 重组酵母菌株的筛选与鉴定 | 第62页 |
| 5.2.4 重组酵母菌株产物的检测 | 第62-63页 |
| 5.3 实验结果及分析 | 第63-69页 |
| 5.3.1 SmTAT、SmHPPR和SmRAS共表达载体的构建——三表达框法 | 第63-65页 |
| 5.3.2 SmTAT、SmHPPR和SmRAS共表达载体的构建——T2A法 | 第65-66页 |
| 5.3.3 pPICZB空载酵母菌株的筛选与鉴定 | 第66页 |
| 5.3.4 pPICZB-3K和pPICZB-2A重组酵母菌株的获得 | 第66-67页 |
| 5.3.5 三基因共表达重组酵母产物检测 | 第67-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第6章 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第83页 |
