| 目录 | 第3-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩写词 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 技术路线 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-50页 |
| 实验材料 | 第17-27页 |
| 1 组织标本 | 第17页 |
| 2 细胞系 | 第17页 |
| 3 质粒 | 第17-19页 |
| 4 菌种 | 第19页 |
| 5 实验动物 | 第19页 |
| 6 细胞培养基、试剂盒、试剂及耗材 | 第19-21页 |
| 7 MALAT1基因信息、引物、siRNA/shRNA、RNAmimic | 第21-23页 |
| 8 主要实验设备 | 第23-24页 |
| 9 常用溶液配制 | 第24-26页 |
| 10 网络资源及软件 | 第26-27页 |
| 实验方法 | 第27-50页 |
| 1 细胞培养 | 第27-29页 |
| 2 RNA提取和real-time PCR | 第29-33页 |
| 3 提取细胞总蛋白和Westemblot实验 | 第33-35页 |
| 4 MALAT1敲低对胰腺癌细胞系生物学行为的影响 | 第35-38页 |
| 5 MALAT1敲低稳定转染细胞株的构建 | 第38页 |
| 6 MALA1敲低体内对胰腺癌细胞增殖、转移能力的影响 | 第38-39页 |
| 7 MALAT1片段荧光素酶报告基因构建及双荧光素酶报告基因实验 | 第39-44页 |
| 8 Northern blot探针制备及Northern blot实验 | 第44-47页 |
| 9 ISH(核苷酸原位杂交) | 第47-48页 |
| 10 血清MALAT1片段定量 | 第48-50页 |
| 实验结果 | 第50-79页 |
| 第一部分 在胰腺癌中筛选差异表达的IncRNAs | 第50-55页 |
| 1 搜索并下载胰腺癌表达谱数据 | 第50页 |
| 2 差异表达IncRNAs的筛选 | 第50-53页 |
| 3 基因功能富集(GO)分析 | 第53-55页 |
| 第二部分 MALAT1在胰腺导管腺癌细胞系、组织及血清中的表达检测 | 第55-59页 |
| 1 MALAT1在胰腺癌细胞系中表达的验证 | 第55-56页 |
| 2 MALAT1在胰腺癌组织中的表达 | 第56-57页 |
| 3 MALAT1片段在胰腺癌患者血清中的检测 | 第57-59页 |
| 第三部分 MALAT1体外功能实验验证 | 第59-70页 |
| 1 siRNA敲低MALAT1的表达水平 | 第60-61页 |
| 2 CCK-8实验检测细胞增殖 | 第61-62页 |
| 3 EdU增殖检测 | 第62-63页 |
| 4 集落形成实验 | 第63-64页 |
| 5 敲低MALAT1对胰腺癌细胞系凋亡的影响 | 第64-65页 |
| 6 敲低MALAT1对胰腺癌细胞系细胞周期的影响 | 第65-66页 |
| 7 敲低MALT1对PDAC细胞体外迁移能力的影响 | 第66-67页 |
| 8 敲低MALAT1对PDAC细胞体外侵袭能力的影响 | 第67-68页 |
| 9 MALAT1的过表达实验 | 第68-70页 |
| 第四部分 MALAT1敲低稳转细胞系体内功能实验 | 第70-72页 |
| 1 MALAT1敲低稳转细胞系的建立 | 第70-71页 |
| 2 敲低MALAT1抑制裸鼠移植瘤的生长 | 第71-72页 |
| 3 敲低MALAT1抑制胰腺癌体内的转移 | 第72页 |
| 第五部分 靶向MALAT1的miRNAs生物信息学分析及验证 | 第72-79页 |
| 1 预测靶向MALAT1的miRNAs | 第72-73页 |
| 2 MALAT1与miR-217在胰腺癌细胞系及组织中的表达关系 | 第73-75页 |
| 3 miR-217与MALAT1的调控关系验证实验 | 第75-79页 |
| 讨论 | 第79-87页 |
| 一 胰腺癌中IncRNA的异常表达及MALAT1的表达 | 第79-81页 |
| 二 MALAT1在体外发挥促癌基因的作用 | 第81-82页 |
| 三 体内实验证明敲低MALAT1对胰腺癌有抑制作用 | 第82页 |
| 四 MALAT1受miR-217调控,同时调控KRAS蛋白 | 第82-84页 |
| 五 MALAT1的过表达实验技术 | 第84-85页 |
| 1 RNAa过表达MALAT1 | 第84-85页 |
| 2 TALEA激活MA-T1表达 | 第85页 |
| 六 本研究需要进一步阐述的问题 | 第85-87页 |
| 小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
| 文献综述 | 第96-105页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 基金资助 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
