| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 转录因子的概念、结构特征、类型 | 第14页 |
| ·转录因子的概念 | 第14页 |
| ·转录因子的结构特征 | 第14页 |
| ·转录因子的类型 | 第14页 |
| 2 WRKY 转录因子家族 | 第14-18页 |
| ·WRKY 转录因子结构特点及其分类 | 第15页 |
| ·WRKY 转录因子的表达活性 | 第15-17页 |
| ·WRKY 转录因子的生物学功能 | 第17-18页 |
| 3 RACE 简介 | 第18-21页 |
| ·RACE 原理 | 第18-19页 |
| ·SMART-RACE | 第19-20页 |
| ·RACE 的应用 | 第20-21页 |
| 4 实时荧光定量PCR 技术简介、定量方法及应用 | 第21-25页 |
| ·实时荧光定量PCR 工作原理 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量的常用的荧光化学方法 | 第22-24页 |
| ·DNA 结合染料（SYBR Green I） | 第22-23页 |
| ·Taq Man 实验 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR 的定量方法 | 第24页 |
| ·实时荧光定量PCR 的应用 | 第24-25页 |
| 第二章 番茄WRKY 基因的克隆及生物信息学分析 | 第25-56页 |
| 1 实验材料 | 第25-27页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第25-26页 |
| ·常用酶和试剂 | 第25页 |
| ·常用溶液和缓冲液的配制 | 第25-26页 |
| ·PCR 所用引物及其序列 | 第26页 |
| ·所用软件及网址 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-39页 |
| ·RNA 的提取 | 第27-29页 |
| ·番茄总RNA 提取 | 第27-28页 |
| ·无RNase-free 的DNase 处理 | 第28-29页 |
| ·5'单链cDNA 的合成(sscDNA 的合成） | 第29-30页 |
| ·特异片段的获得 | 第30-31页 |
| ·5'RACE | 第31页 |
| ·3'单链cDNA 的合成(sscDNA 的合成） | 第31-32页 |
| ·特异片段的获得 | 第32页 |
| ·3'RACE | 第32-33页 |
| ·番茄WRKY 全长基因和全长cDNA 的克隆 | 第33-35页 |
| ·番茄基因组DNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·单链cDNA 的合成 | 第34页 |
| ·PCR 反应 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第35页 |
| ·PCR 产物与pMD-19T 载体的连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第36页 |
| ·质粒的制备 | 第36-37页 |
| ·重组体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·酶切鉴定 | 第37页 |
| ·PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第38页 |
| ·生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3 结果分析 | 第39-56页 |
| ·提取的番茄总RNA 纯度和完整性分析 | 第39页 |
| ·3'特异片段的获得 | 第39-41页 |
| ·以cDNA 为模板获得番茄WRKY 基因3'特异片段 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·5'特异片段的获得 | 第41-42页 |
| ·以cDNA 为模板获得番茄WRKY 基因5'特异片段 | 第41页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·RACE 实验克隆全长基因 | 第42-46页 |
| ·3'RACE 实验 | 第42-44页 |
| ·5'RACE 实验 | 第44-46页 |
| ·番茄WRKY 全长基因和全长cDNA 的克隆 | 第46-47页 |
| ·番茄WRKY 全长cDNA 的拼接及生物信息学分析 | 第47-56页 |
| ·番茄WRKY 基因序列拼接结果及推测的蛋白序列 | 第47-48页 |
| ·CDD 分析 | 第48-49页 |
| ·开放阅读框（ORF）预测和限制性酶切位点分析 | 第49页 |
| ·Blastn 分析 | 第49-50页 |
| ·限制性酶切位点分析 | 第50页 |
| ·同源性分析 | 第50-53页 |
| ·WRKY 蛋白结构和功能预测 | 第53-56页 |
| 第三章 实时荧光定量PCR 分析番茄WRKY 基因的表达模式 | 第56-74页 |
| 1 材料与方法 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·主要试剂药品 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-60页 |
| ·番茄苗处理 | 第57-58页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·番茄不同处理下总RNA 提取 | 第58-59页 |
| ·番茄单链cDNA 获得 | 第59页 |
| ·标准曲线的制备 | 第59-60页 |
| ·标准品的制备 | 第59-60页 |
| ·按下列组分配制荧光定量PCR 的反应液 | 第60页 |
| ·各个不同处理实时荧光定量PCR 反应 | 第60页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第60页 |
| 3 结果分析 | 第60-74页 |
| ·actin 基因与目的基因荧光定量PCR 条件优化 | 第62页 |
| ·标准曲线的建立 | 第62-64页 |
| ·番茄WRKY 基因在各个不同处理下的表达情况分析 | 第64-72页 |
| ·JA 不同时间处理番茄WRKY 基因表达情况 | 第64-66页 |
| ·SA 不同时间处理番茄WRKY 基因表达情况 | 第66-68页 |
| ·NaCl 不同时间处理番茄WRKY 基因表达情况 | 第68-70页 |
| ·4℃不同时间处理番茄WRKY 基因表达情况 | 第70-72页 |
| ·番茄WRKY 基因的组织特异性表达分析 | 第72-74页 |
| 第四章 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
