| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 1 绪论 | 第18-31页 |
| 1.1 毛白杨纯营养生长的相关研究 | 第18页 |
| 1.2 AtREM1 启动子和 Barnase 基因 | 第18-19页 |
| 1.3 转基因技术在杨树遗传改良上的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 应用于毛白杨的遗传转化方法 | 第20-21页 |
| 1.5 影响杨树遗传转化的因素 | 第21-23页 |
| 1.5.1 杨树的基因型对遗传转化的影响 | 第21-22页 |
| 1.5.2 农杆菌菌株对遗传转化的影响 | 第22页 |
| 1.5.3 再生过程中所用的外植体对遗传转化的影响 | 第22-23页 |
| 1.5.4 共培养对遗传转化的影响 | 第23页 |
| 1.6 转基因技术的应用 | 第23-25页 |
| 1.6.1 通过转基因技术诱导形成显性突变体 | 第23-24页 |
| 1.6.2 通过靶向基因激活形成高效突变体 | 第24页 |
| 1.6.3 通过报告基因检测基因表达缺陷和增强子缺陷 | 第24-25页 |
| 1.7 转基因技术应用的前景和所面临的挑战 | 第25-28页 |
| 1.7.1 转基因技术是一个昂贵并耗时的过程 | 第25-26页 |
| 1.7.2 转基因技术的特异性 | 第26页 |
| 1.7.3 转基因技术的研究尚未深入 | 第26-27页 |
| 1.7.4 转基因技术的未定向性 | 第27页 |
| 1.7.5 从基因安全方面考虑对转基因植株的管理 | 第27-28页 |
| 1.8 本研究的目的意义、研究内容及技术路线 | 第28-31页 |
| 1.8.1 本研究的研究目的、意义 | 第28-29页 |
| 1.8.2 课题的主要研究内容 | 第29-30页 |
| 1.8.3 技术路线 | 第30-31页 |
| 2 毛白杨高效再生体系的建立 | 第31-57页 |
| 2.1 材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.2 实验仪器及设备 | 第31-32页 |
| 2.1.3 组织培养所用培养基 | 第32页 |
| 2.1.3.1 启动培养基（BD 培养基） | 第32页 |
| 2.1.3.2 愈伤诱导培养基 | 第32页 |
| 2.1.3.3 不定芽诱导培养基 | 第32页 |
| 2.1.3.4 生根培养基（NI 培养基） | 第32页 |
| 2.1.4 实验试剂及其配制 | 第32-33页 |
| 2.1.4.1 植物激素 | 第32-33页 |
| 2.1.4.2 其它组培所需试剂 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 外植体的处理 | 第33-34页 |
| 2.2.1.1 室外外植体的处理 | 第33页 |
| 2.2.1.2 室内外植体的处理 | 第33-34页 |
| 2.2.2 PGRs 对愈伤诱导的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.3 TDZ 对不定芽诱导的影响 | 第36页 |
| 2.2.4 无菌苗的生根培养 | 第36-37页 |
| 2.2.5 炼苗及移栽 | 第37页 |
| 2.2.6 统计方法 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-52页 |
| 2.3.1 外植体最佳消毒方法的确定 | 第37-38页 |
| 2.3.2 外植体种类对愈伤诱导的影响 | 第38-40页 |
| 2.3.3 PGRs 对愈伤诱导的影响 | 第40-45页 |
| 2.3.3.1 细胞分裂素和细胞生长素对愈伤诱导的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.3.2 两种细胞分裂素（ZT 和 BA）对愈伤诱导的影响 | 第41-45页 |
| 2.3.4 不同浓度的 TDZ 对不定芽再生的影响 | 第45-47页 |
| 2.3.5 不定芽形成的过程 | 第47-48页 |
| 2.3.6 MS 盐及植物激素对不定芽生根的影响 | 第48-50页 |
| 2.3.6.1 MS 盐对不定芽生根的影响 | 第48页 |
| 2.3.6.2 IBA 及 NAA 对不定芽生根的影响 | 第48-50页 |
| 2.3.7 无菌苗的移栽 | 第50-52页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第52-55页 |
| 2.4.1 最佳外植体的选择 | 第52-53页 |
| 2.4.1.1 外植体的消毒处理 | 第52页 |
| 2.4.1.2 外植体种类对愈伤诱导的影响 | 第52-53页 |
| 2.4.1.3 外植体种类对不定芽诱导的影响 | 第53页 |
| 2.4.2 植物生长调节剂（PGRs）对再生体系建立的影响 | 第53-55页 |
| 2.4.2.1 PGRs 对愈伤诱导的影响 | 第53-55页 |
| 2.4.2.2 PGRs 对不定芽再生的影响 | 第55页 |
| 2.4.2.3 PGRs 及对无菌苗生根的影响 | 第55页 |
| 2.5 结论 | 第55-57页 |
| 3 农杆菌介导的毛白杨遗传转化体系的建立 | 第57-92页 |
| 3.1 材料 | 第57-64页 |
| 3.1.1 供试毛白杨材料 | 第57页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第57-58页 |
| 3.1.3 Bar 基因 PCR 反应引物 | 第58页 |
| 3.1.4 实验仪器及设备 | 第58-59页 |
| 3.1.5 主要试剂及其配制 | 第59-63页 |
| 3.1.5.1 琼脂糖凝胶电泳所需试剂及其配制 | 第59页 |
| 3.1.5.2 DNA 的 PCR 扩增反应所用试剂 | 第59页 |
| 3.1.5.3 植物基因组 DNA 提取试剂及其配制 | 第59-62页 |
| 3.1.5.4 抗生素母液的配制 | 第62-63页 |
| 3.1.6 遗传转化实验所用培养基及其配制 | 第63-64页 |
| 3.1.6.1 农杆菌培养用的 YEB 培养基 | 第63页 |
| 3.1.6.2 其它培养基 | 第63-64页 |
| 3.2 方法 | 第64-72页 |
| 3.2.1 农杆菌中目的基因的 PCR 扩增鉴定 | 第64-66页 |
| 3.2.1.1 SDS 法小量提取农杆菌质粒 | 第64-65页 |
| 3.2.1.2 表达载体导入农杆菌的 PCR 扩增鉴定 | 第65页 |
| 3.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第65-66页 |
| 3.2.2 含目的基因农杆菌介导转化毛白杨无菌苗叶片 | 第66-67页 |
| 3.2.2.1 待转化材料的预培养 | 第66页 |
| 3.2.2.2 农杆菌侵染液的制备 | 第66-67页 |
| 3.2.2.3 农杆菌对外植体的侵染及共培养 | 第67页 |
| 3.2.3 被侵染外植体内工程农杆菌的检测 | 第67页 |
| 3.2.4 经侵染外植体的延迟培养 | 第67-68页 |
| 3.2.5 外植体的脱菌培养 | 第68页 |
| 3.2.5.1 农杆菌的 Cef 耐性检测 | 第68页 |
| 3.2.5.2 外植体的 Cef 耐性检测 | 第68页 |
| 3.2.5.3 外植体的脱菌培养 | 第68页 |
| 3.2.6 外植体的恢复培养 | 第68-69页 |
| 3.2.7 经侵染外植体的筛选培养 | 第69页 |
| 3.2.7.1 外植体 PPT 耐性检测 | 第69页 |
| 3.2.7.2 经侵染外植体的性筛选 | 第69页 |
| 3.2.8 不定芽的嫁接 | 第69-70页 |
| 3.2.9 转基因植株的检测 | 第70-72页 |
| 3.2.9.1 转基因植株的抗性检测 | 第70页 |
| 3.2.9.2 转基因植株的 PCR 检测 | 第70-72页 |
| 3.3 结果与分析 | 第72-86页 |
| 3.3.1 农杆菌菌体中目的基因的 PCR 验证 | 第72-73页 |
| 3.3.2 不同菌体重悬液对遗传转化的影响 | 第73-75页 |
| 3.3.2.1 不同菌体垂悬液对农杆菌生长的影响 | 第73-74页 |
| 3.3.2.2 不同菌体重悬液对外植体的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.3 工程菌液浓度对遗传转化的影响 | 第75-77页 |
| 3.3.3.1 工程菌液浓度对侵染力的影响 | 第75-76页 |
| 3.3.3.2 工程菌液浓度对外植体再生分化的影响 | 第76-77页 |
| 3.3.4 农杆菌侵染时间对遗传转化的影响 | 第77-79页 |
| 3.3.4.1 农杆菌不同侵染时间对外植体的侵染力的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.4.2 不同侵染时间对外植体的损伤度 | 第78-79页 |
| 3.3.5 共培养时间对遗传转化的影响 | 第79页 |
| 3.3.6 外植体对遗传转化的影响 | 第79-81页 |
| 3.3.6.1 无菌苗的继代次数对遗传转化的影响 | 第79-81页 |
| 3.3.7 脱菌培养基中脱菌抗生素（Cef）浓度的确定 | 第81-82页 |
| 3.3.8 外植体抗生素耐受压的确定 | 第82-83页 |
| 3.3.9 转基因植株的验证 | 第83-86页 |
| 3.3.9.1 转基因植物的 PPT 抗性验证 | 第83-84页 |
| 3.3.9.2 转基因植物的 PCR 验证 | 第84-86页 |
| 3.4 讨论 | 第86-90页 |
| 3.4.1 农杆菌工程菌液的制备对遗传转化的影响 | 第86-88页 |
| 3.4.1.1 不同菌体重悬液对侵染的影响 | 第86-87页 |
| 3.4.1.2 工程菌液浓度对遗传转化的影响 | 第87-88页 |
| 3.4.2 农杆菌侵染时间对遗传转化的影响 | 第88页 |
| 3.4.3 共培养时间对遗传转化率的影响 | 第88-89页 |
| 3.4.4 外植体的处理对遗传转化的影响 | 第89页 |
| 3.4.5 脱菌培养基中脱菌抗生素（Cef）浓度的确定 | 第89-90页 |
| 3.5 结论 | 第90-92页 |
| 4 总论与展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录 | 第101-105页 |
| 1 英文缩写词表（Abbreviations） | 第101-102页 |
| 2 MS 培养基配方表 | 第102-103页 |
| 3 DNA Marker | 第103-104页 |
| 4 含有 Barnase 基因的质粒图谱 | 第104-105页 |
| 个人简历及发表论文情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
