| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 缩写表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 抗真菌药物作用机制及耐药机制 | 第14-17页 |
| 1.1.1 抗真菌药物的作用机制 | 第14-16页 |
| 1.1.2 真菌耐药机制 | 第16-17页 |
| 1.2 ABC转运蛋白家族 | 第17-21页 |
| 1.2.1 ABC转运蛋白家族组成与细胞耐药 | 第17-18页 |
| 1.2.2 ABC转运蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.2.3 ABC转运蛋白作用机制 | 第19页 |
| 1.2.4 酵母ABC转运蛋白 | 第19-21页 |
| 1.2.5 多药物抗性蛋白Pdr5p | 第21页 |
| 1.3 酵母细胞中的脂类成分 | 第21-24页 |
| 1.3.1 麦角甾醇的合成 | 第22-23页 |
| 1.3.2 磷脂的合成 | 第23-24页 |
| 1.3.3 鞘脂的合成 | 第24页 |
| 1.3.4 脂类的运输 | 第24页 |
| 1.4 本文的研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 表达谱芯片筛选 | 第26-36页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 菌株 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.3 酶与化学试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 基因芯片 | 第27页 |
| 2.2.5 芯片样品准备 | 第27-28页 |
| 2.2.6 芯片样品RNA准备 | 第28-30页 |
| 2.3 芯片结果与分析 | 第30-31页 |
| 2.3.1 芯片样品质量检测 | 第30页 |
| 2.3.2 芯片结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 芯片结果分析 | 第31页 |
| 2.4 芯片结果验证 | 第31-32页 |
| 2.5 生物信息学分析YAR068W/YHR214W-A | 第32-34页 |
| 2.5.1 同源性分析 | 第32-33页 |
| 2.5.2 信号肽分析 | 第33页 |
| 2.5.3 蛋白结构预测 | 第33-34页 |
| 2.6 本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 基因表达分析 | 第36-56页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第36页 |
| 3.2.2 实验仪器和设备 | 第36-37页 |
| 3.2.3 培养基 | 第37-38页 |
| 3.2.4 试剂与溶液 | 第38-39页 |
| 3.2.5 酶与生化试剂 | 第39页 |
| 3.3 敲除突变株的构建 | 第39-50页 |
| 3.3.1 质粒pUG66的提取 | 第39-40页 |
| 3.3.2 引物的PCR扩增 | 第40-43页 |
| 3.3.3 PCR产物回收 | 第43-44页 |
| 3.3.4 LiAc/SS载体DNA/PEG高效酵母转化法 | 第44-45页 |
| 3.3.5 单克隆基因组的提取 | 第45页 |
| 3.3.6 抗性基因拯救 | 第45-46页 |
| 3.3.7 质粒丢失 | 第46页 |
| 3.3.8 YAR068W/YHR214W-A RNA表达量分析 | 第46页 |
| 3.3.9 YAR068W/YHR214W-A蛋白表达量分析 | 第46-47页 |
| 3.3.10 Western bloting | 第47-50页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第50-54页 |
| 3.4.1 BY4741Δyar068W菌株的构建 | 第50页 |
| 3.4.2 BY4741Δyhr214W-A菌株的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.3 BY4741Δyar068WΔyhr214W-A菌株的构建 | 第51-52页 |
| 3.4.4 BY4741Δyar068WΔyhr214W-AΔpdr5菌株的构建 | 第52页 |
| 3.4.5 YAR068W/YHR214W-A自身表达分析 | 第52-53页 |
| 3.4.6 YAR068W、YHR214W-A差异时空表达分析 | 第53-54页 |
| 3.4.7 YAR068W/YHR214W-A对PDR5表达的影响 | 第54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 蛋白定位研究 | 第56-69页 |
| 4.1 前言 | 第56页 |
| 4.2 材料方法 | 第56-64页 |
| 4.2.1 菌种 | 第56-58页 |
| 4.2.2 培养基 | 第58-59页 |
| 4.2.3 实验仪器和设备 | 第59-60页 |
| 4.2.4 酶与试剂 | 第60页 |
| 4.2.5 引物序列 | 第60-62页 |
| 4.2.6 诱导融合蛋白表达 | 第62-63页 |
| 4.2.7 强启动子表达融合蛋白 | 第63页 |
| 4.2.8 Mitotracker red CMXROs染线粒体 | 第63-64页 |
| 4.2.9 Confocal显微镜观察融合蛋白定位 | 第64页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第64-68页 |
| 4.3.1 Yar068Wp、Yhr214W-Ap结构预测 | 第64-65页 |
| 4.3.2 Yar068Wp-GFP、Yhr214W-Ap-GFP与Pma1p-RFP共定位 | 第65-66页 |
| 4.3.3 Yar068Wp-GFP与Mitotracker共定位 | 第66页 |
| 4.3.4 Yar068Wp缺失相应跨膜螺旋的GFP嵌合蛋白定位 | 第66-67页 |
| 4.3.5 Yar068Wp N端GFP融合蛋白定位 | 第67-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 蛋白功能初步研究 | 第69-78页 |
| 5.1 前言 | 第69页 |
| 5.2 材料方法 | 第69-72页 |
| 5.2.1 菌株 | 第69页 |
| 5.2.2 培养基 | 第69页 |
| 5.2.3 实验仪器和设备 | 第69-70页 |
| 5.2.4 试剂 | 第70页 |
| 5.2.5 耐药实验(液体) | 第70-71页 |
| 5.2.6 耐药实验(固体) | 第71页 |
| 5.2.7 酵母细胞内血红素含量测定 | 第71-72页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第72-77页 |
| 5.3.1 Yar068Wp、Yhr214W-Ap对细胞AmB耐受性的影响 | 第72-73页 |
| 5.3.2 Yar068Wp、Yhr214W-Ap对唑类药物耐受性的影响 | 第73-75页 |
| 5.3.3 Yar068Wp、Yhr214W-Ap对酿酒酵母外排泵表达的影响 | 第75页 |
| 5.3.4 Yar068Wp、Yhr214W-Ap对ERG11表达的影响 | 第75-76页 |
| 5.3.5 Yar068Wp、Yhr214W-Ap对细胞内Heme含量的影响 | 第76-77页 |
| 5.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第六章 总结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
