| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 棉花耐盐性研究概况 | 第13-14页 |
| 1.1.1 盐胁迫及其对棉花影响的范围 | 第13页 |
| 1.1.2 高盐对棉花生长的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.3 盐胁迫制约棉花生长发育的机制 | 第14页 |
| 1.2 植物耐盐研究 | 第14-15页 |
| 1.3 BASS基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 BASS的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.2 BASS的蛋白结构 | 第16页 |
| 1.4 质体在植物耐盐中的作用 | 第16-17页 |
| 1.5 NMT的原理及研究现状 | 第17页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 GhBASS5基因的分子克隆与鉴定 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株、质粒和载体 | 第19页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第19-21页 |
| 2.1.4 常用试剂及酶 | 第21页 |
| 2.1.5 引物及测序 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 棉花基因组DNA的提取及检测 | 第21页 |
| 2.2.2 棉花基因组RNA的提取及反转录 | 第21-23页 |
| 2.2.3 克隆棉花GhBASS5基因 | 第23-25页 |
| 2.2.4 GhBASS5氨基酸同源序列比对分析以及进化树的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.5 GhBASS5基因的组织特征表达分析 | 第26页 |
| 2.2.6 GhBASS5蛋白的亚细胞和亚组织定位 | 第26-29页 |
| 2.3 结果分析 | 第29-36页 |
| 2.3.1 棉花GhBASS5基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3.2 GhBASS5蛋白同源序列比对分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 GhBASS5的氨基酸序列进化树的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.4 棉花GhBASS5基因的组织表达特征分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 棉花GhBASS5蛋白的亚细胞定位 | 第33-35页 |
| 2.3.6 棉花GhBASS5蛋白免疫荧光亚组织定位 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 3 沉默GhBASS5基因提高陆地棉耐盐性 | 第37-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 菌株、质粒载体 | 第37页 |
| 3.1.3 常用试剂及酶 | 第37页 |
| 3.1.4 培养基,抗生素以及重悬液的配制 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-47页 |
| 3.2.1 含有目的基因片段的沉默载体VIGS-GhBASS5构建 | 第38页 |
| 3.2.2 棉花VIGS体系的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.3 转化植株GhBASS5基因表达水平的检测 | 第39-40页 |
| 3.2.4 沉默GhBASS5基因的陆地棉盐胁迫处理 | 第40-41页 |
| 3.2.5 棉花叶片中叶绿素含量的测定 | 第41页 |
| 3.2.6 棉花叶片中脯氨酸含量的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.7 棉花叶片中丙二醛含量的测定 | 第42页 |
| 3.2.8 棉花叶片中可溶性糖的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.9 棉花叶片中超氧离子、过氧化氢含量和氧化物酶含量及其基因表达水平的测定 | 第43-47页 |
| 3.2.10 棉花根中超氧离子、过氧化氢含量及过氧化物基因表达水平的测定 | 第47页 |
| 3.2.11 BASS家族基因,耐盐相关基因和离子运输相关基因的表达量分析 | 第47页 |
| 3.3 结果分析 | 第47-57页 |
| 3.3.1 病毒诱导基因沉默载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 棉花GhBASS5基因沉默植株表型分析 | 第48页 |
| 3.3.3 目标基因表达水平的检测 | 第48-49页 |
| 3.3.4 盐胁迫对GhBASS5基因沉默的棉花表型的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.5 盐胁迫对棉花叶绿素含量的影响 | 第50页 |
| 3.3.6 盐胁迫对棉花丙二醛含量的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.7 盐胁迫对棉花可溶性糖含量的影响 | 第51页 |
| 3.3.8 盐胁迫下棉花脯氨酸含量的测定 | 第51-52页 |
| 3.3.9 盐胁迫对棉花根部O_2~-和H_2O_2及过氧化物基因表达水平的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.10 盐胁迫对棉花叶片O_2~-和H_2O_2及过氧化物含量和基因表达水平的影响 | 第53-55页 |
| 3.3.11 盐胁迫对BASS家族,胁迫响应和离子运输基因表达量的影响 | 第55-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 4 GhBASS5基因参与钠离子运输 | 第59-66页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.2 菌株、质粒和载体 | 第59页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 棉花中钠钾离子含量的测定 | 第59-60页 |
| 4.2.2 棉花根,叶中Na~+,K~+含量随时间的变化 | 第60页 |
| 4.2.3 SBFI测定棉花根部原生质体内的钠离子含量 | 第60-61页 |
| 4.2.4 NMT测定棉花根部钠离子流量 | 第61-62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-63页 |
| 4.3.1 盐胁迫下棉花不同组织钠钾离子含量的测定 | 第62页 |
| 4.3.2 GhBASS5参与Na~+在膜上运输 | 第62页 |
| 4.3.3 NMT:沉默GhBASS5提高棉花根部对Na~+的泵出能力 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-66页 |
| 5 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录一 本试验所用引物列表 | 第72-74页 |
| 附录二 实验所用主要仪器 | 第74-75页 |
| 个人简历 | 第75页 |
| 硕士期间发表学术论文与研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
