| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1.1 抗生素研究进展 | 第16页 |
| 1.2 聚酮化合物简介 | 第16-19页 |
| 1.3 聚醚类抗生素的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 聚醚类抗生素的应用前景 | 第19-20页 |
| 1.3.2 聚醚类抗生素的分类 | 第20页 |
| 1.3.3 聚醚类抗生素生物合成基因簇 | 第20-23页 |
| 1.4 钙霉素研究进展 | 第23-29页 |
| 1.4.1 钙霉素结构 | 第23-26页 |
| 1.4.2 钙霉素的应用 | 第26页 |
| 1.4.3 钙霉素的生物合成推导 | 第26-29页 |
| 1.5 杆状病毒表达系统简介 | 第29-31页 |
| 1.6 研究内容和目的 | 第31-32页 |
| 第二章 验材料与方法 | 第32-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-40页 |
| 2.1.0 菌体 | 第32-33页 |
| 2.1.1 质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 本研究所用引物 | 第33-35页 |
| 2.1.3 培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.4 生化试剂与缓冲液 | 第36-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-52页 |
| 2.2.1 菌种培养及保藏 | 第40页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒提取 | 第40-41页 |
| 2.2.3 链霉菌总 DNA 的小量提取 | 第41页 |
| 2.2.4 Bacmid 提取 | 第41-42页 |
| 2.2.5 DNA 片段的凝胶回收 | 第42页 |
| 2.2.6 载体和外源片段的酶连反应 | 第42-43页 |
| 2.2.7 大肠杆菌 DH10B 感受态细胞的制备（CaCl2）及转化 | 第43页 |
| 2.2.8 大肠杆菌 DH10Bac 感受态细胞的转化 | 第43-44页 |
| 2.2.9 大肠杆菌与链霉菌属间接合转移 | 第44-45页 |
| 2.2.10 基因中断菌株回补株筛选及验证 | 第45页 |
| 2.2.11 菌株发酵及发酵产物萃取 | 第45页 |
| 2.2.12 HPLC-MS 检测分析发酵产物 | 第45-46页 |
| 2.2.13 发酵条件的优化 | 第46页 |
| 2.2.14 链霉菌菌体破碎及蛋白提取 | 第46-47页 |
| 2.2.15 蛋白的 Western Blotting 验证 | 第47页 |
| 2.2.16 PEG 沉淀蛋白 | 第47-49页 |
| 2.2.17 蛋白亲和纯化 | 第49-50页 |
| 2.2.18 病毒制备 | 第50-51页 |
| 2.2.19 小剂量蛋白提取及纯化 | 第51页 |
| 2.2.20 生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 第三章 calD 在钙霉素合成后修饰途径中的功能分析 | 第52-62页 |
| 3.1 calD 的生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 3.2 calD 中断株接合回补及回补株验证 | 第54-56页 |
| 3.3 回补菌株 LYL3（ΔcalD::calD-Cflag）Calcimycin 的产量变化 | 第56-57页 |
| 3.4 calD 突变株发酵产物的高分辨率质谱及二级质谱分析 | 第57-61页 |
| 3.5 calD 在钙霉素生物合成后修饰途径中功能预测 | 第61页 |
| 3.6 小结与展望 | 第61-62页 |
| 第四章 calD 回补株发酵优化及蛋白纯化 | 第62-68页 |
| 4.1 发酵培养基对产素的影响 | 第62-64页 |
| 4.2 发酵时间对产量的影响 | 第64-65页 |
| 4.3 Western Blotting 验证 CalD 蛋白 | 第65-66页 |
| 4.4 亲和纯化 CalD 蛋白 | 第66-67页 |
| 4.5 小结与展望 | 第67-68页 |
| 第五章 克隆聚酮合酶基因 | 第68-83页 |
| 5.1 构建带标签重组质粒克隆 | 第69-74页 |
| 5.1.1 构建 pHMBP-calA1Nhis 重组质粒 | 第69-70页 |
| 5.1.2 构建 pHMBP-calA2CstrepIII 重组质粒 | 第70-71页 |
| 5.1.3 构建 pHMBP-calA3CstrepIII 重组质粒 | 第71-73页 |
| 5.1.4 构建 pKL-calA4Nfla 重组质粒 | 第73-74页 |
| 5.2 不带标签重组质粒的克隆构建 | 第74-81页 |
| 5.2.1 构建 pHMBP-CalA1 重组质粒 | 第74-76页 |
| 5.2.2 构建 pHMBP-CalA2 重组质粒 | 第76-77页 |
| 5.2.3 构建 pHMBP-CalA3 重组质粒 | 第77-78页 |
| 5.2.4 构建 pHMBP-CalA4 重组质粒 | 第78-80页 |
| 5.2.5 构建 pHMBP-CalA5 重组质粒 | 第80-81页 |
| 5.3 重组病毒的制备及验证 | 第81-83页 |
| 5.4 小结与展望 | 第83页 |
| 第六章 杆状病毒表达系统表达聚酮合酶 | 第83-88页 |
| 6.1 细胞培养 | 第84页 |
| 6.2 病毒制备 | 第84-85页 |
| 6.3 蛋白纯化 | 第85-87页 |
| 6.4 小结与展望 | 第87-88页 |
| 第七章 总结和展望 | 第88-90页 |
| 7.1 研究总结和工作创新点 | 第88-89页 |
| 7.2 研究展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第95-96页 |
| 附件 | 第96页 |
