| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-30页 |
| 1 引言 | 第18页 |
| 2 黄酮类化合物 | 第18-23页 |
| 2.1 黄酮类化合物多样性 | 第18-20页 |
| 2.2 黄酮类化合物的功能 | 第20-21页 |
| 2.3 黄酮类化合物的生物合成途径 | 第21-23页 |
| 3 参与黄酮后修饰的关键酶 | 第23-27页 |
| 3.1 氧甲基转移酶 | 第23-25页 |
| 3.2 糖基转移酶 | 第25-27页 |
| 4 黄酮类化合物的组合生物合成 | 第27-28页 |
| 5 立题依据与研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 钝鳞紫背苔Ⅱ型氧甲基转移酶的克隆与功能鉴定 | 第30-56页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第30-34页 |
| 2.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.2 菌种和质粒 | 第30-31页 |
| 2.3 实验主要试剂 | 第31页 |
| 2.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.5 主要溶液及培养基 | 第32-33页 |
| 2.6 PCR引物序列 | 第33-34页 |
| 3 实验方法 | 第34-44页 |
| 3.1 基因序列分析 | 第34页 |
| 3.2 钝鳞紫背苔RNA的提取及cDNA合成 | 第34-35页 |
| 3.3 PaCOMT2的3'RACE | 第35-37页 |
| 3.4 PaCOMTs目的基因克隆 | 第37-38页 |
| 3.5 目的基因蛋白表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.6 重组蛋白的原核表达 | 第40-41页 |
| 3.7 酶活功能鉴定 | 第41-42页 |
| 3.8 基因烟草定位的研究 | 第42-44页 |
| 3.9 大肠杆菌体内生产目标化合物 | 第44页 |
| 4 实验结果 | 第44-54页 |
| 4.1 序列分析 | 第44-48页 |
| 4.2 原核表达载体构建和蛋白纯化 | 第48-49页 |
| 4.3 体外酶活结果 | 第49-53页 |
| 4.4 亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 4.5 菌体内金合欢素的合成 | 第54页 |
| 5 总结 | 第54-56页 |
| 第三章 苔类植物Ⅰ型氧甲基转移酶的功能鉴定 | 第56-78页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第56-57页 |
| 2.1 植物材料 | 第56页 |
| 2.2 菌种和载体 | 第56页 |
| 2.3 主要溶液和培养基 | 第56页 |
| 2.4 实验仪器 | 第56页 |
| 2.5 PCR引物 | 第56-57页 |
| 3 实验方法 | 第57-65页 |
| 3.1 序列分析 | 第57-58页 |
| 3.2 引物设计 | 第58页 |
| 3.3 目的基因克隆和蛋白表达载体构建 | 第58-59页 |
| 3.4 MpOMT和PaF6OMT基因点突变 | 第59-60页 |
| 3.5 蛋白表达 | 第60页 |
| 3.6 蛋白体外酶活功能鉴定 | 第60-61页 |
| 3.7 利用大肠杆菌生产甲基化化合物 | 第61-64页 |
| 3.8 东莨菪内酯和千层纸素A的细胞毒测试 | 第64-65页 |
| 4 实验结果 | 第65-76页 |
| 4.1 基因序列分析 | 第65-67页 |
| 4.2 原核表达载体构建和蛋白纯化 | 第67-68页 |
| 4.3 蛋白活性 | 第68-70页 |
| 4.4 序列比对 | 第70-71页 |
| 4.5 MpOMT和PaF6OMT的突变 | 第71-73页 |
| 4.6 利用大肠杆菌生产甲基化化合物 | 第73-76页 |
| 4.7 千层纸素A和东莨菪内酯的细胞毒 | 第76页 |
| 5 总结 | 第76-78页 |
| 第四章 钝鳞紫背苔中糖基转移酶的克隆与功能鉴定 | 第78-89页 |
| 1 前言 | 第78页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第78-80页 |
| 2.1 植物材料 | 第78页 |
| 2.2 PCR引物 | 第78-79页 |
| 2.3 其他材料 | 第79-80页 |
| 3 实验方法 | 第80-83页 |
| 3.1 序列比对及进化树分析 | 第80页 |
| 3.2 PaUGTs基因克隆 | 第80-81页 |
| 3.3 目的片段蛋白表达载体的构建 | 第81-82页 |
| 3.4 蛋白表达 | 第82页 |
| 3.5 蛋白活性测定 | 第82-83页 |
| 4 实验结果 | 第83-88页 |
| 4.1 PaUGTs序列分析 | 第83-86页 |
| 4.2 原核表达载体构建和蛋白纯化 | 第86页 |
| 4.3 蛋白活性 | 第86-88页 |
| 5 总结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100页 |