| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第12-19页 |
| 1 胚胎干细胞简介及研究进展 | 第12-13页 |
| 2 胚胎干细胞体外培养条件及特性 | 第13-14页 |
| 3 胚胎干细胞自我更新的机制 | 第14-16页 |
| 4 Id基因的研究进展 | 第16-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-42页 |
| 1 主要仪器和试剂材料 | 第19-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-42页 |
| 2.1 细胞的培养 | 第22页 |
| 2.2 mESCs的传代 | 第22-23页 |
| 2.3 细胞的冻存 | 第23页 |
| 2.4 过表达质粒的构建 | 第23-30页 |
| 2.4.1 Id2和Id3基因片段的克隆 | 第23-27页 |
| 2.4.2 重组质粒的构建 | 第27-30页 |
| 2.5 过表达46C胚胎干细胞系的构建 | 第30-34页 |
| 2.5.1 细胞转染与筛选 | 第30页 |
| 2.5.2 Western Blotting鉴定过表达 | 第30-34页 |
| 2.6 慢病毒干扰质粒的构建 | 第34-37页 |
| 2.6.1 shRNA引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.6.2 shRNA质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.6.3 慢病毒的制备 | 第36-37页 |
| 2.7 Id2-shRNA细胞株的建立 | 第37页 |
| 2.8 碱性磷酸酶染色(Alkaline phosphatase staining,AP) | 第37页 |
| 2.9 免疫荧光(Immunofluorescence staining,IF) | 第37-38页 |
| 2.10 荧光实时定量PCR(qRT-PCR) | 第38-42页 |
| 第三章 结果 | 第42-54页 |
| 1 小鼠46C胚胎干细胞的培养 | 第42-43页 |
| 2 Id2、Id3过表达后对mESCs的影响 | 第43-47页 |
| 3 下调Id2的表达对mESCs的影响 | 第47-48页 |
| 4 Id2对mESCs信号通路的作用 | 第48-49页 |
| 5 Id2靶基因筛选 | 第49-51页 |
| 5.1 RNA sequence筛选Id2下游基因 | 第49-50页 |
| 5.2 测序结果验证 | 第50-51页 |
| 6 c-Myc和n-Myc功能性验证 | 第51-54页 |
| 6.1 在PB-Flag-Id2细胞中下调c-Myc和n-Myc | 第51-53页 |
| 6.2 在下调Id2的细胞中过表达c-Myc和n-Myc | 第53-54页 |
| 第四章 结论 | 第54-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第64页 |
