猪α、γ干扰素的原核表达、纯化及抗病毒活性初步检测
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1 干扰素概述 | 第12-23页 |
| 1.1 干扰素的来源和分类 | 第12-14页 |
| 1.2 干扰素的分子结构 | 第14-15页 |
| 1.3 干扰素的生物学活性和作用机制 | 第15-18页 |
| 1.3.1 IFN-α的生物学活性和作用机制 | 第17页 |
| 1.3.2 IFN-γ的生物学活性和作用机制 | 第17-18页 |
| 1.4 基因工程干扰素的临床应用 | 第18-19页 |
| 1.5 前景展望 | 第19-21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 猪α、γ干扰素的载体构建、原核表达及纯化 | 第23-42页 |
| 1 材料 | 第23-26页 |
| 1.1 实验菌株 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第27页 |
| 2.2 目的基因的扩增及纯化 | 第27-30页 |
| 2.2.1 DNA 和RNA 的提取 | 第27-29页 |
| 2.2.2 目的基因扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 PCR 产物纯化、回收 | 第30页 |
| 2.3 PCR 产物和pET30a(+)的酶切 | 第30-31页 |
| 2.4 目的基因与载体连接 | 第31页 |
| 2.5 重组质粒的转化 | 第31-32页 |
| 2.6 挑选阳性克隆并鉴定 | 第32页 |
| 2.7 重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.8 原核表达载体的构建和鉴定 | 第33页 |
| 2.9 目的蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.10 重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.10.1 包涵体的提取 | 第34页 |
| 2.10.2 重组蛋白的变、复性和纯化 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.1 猪IFN-α及IFN-γ基因扩增结果 | 第35页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.3 重组克隆载体的测序与鉴定 | 第36-38页 |
| 3.4 重组质粒的诱导表达结果 | 第38-39页 |
| 3.5 重组蛋白的纯化结果 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 重组蛋白抗病毒活性的初步检测 | 第42-51页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 重组表达菌株 | 第42页 |
| 1.2 培养细胞与病毒 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂及仪器 | 第42页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2.1 重组蛋白含量的测定 | 第43页 |
| 2.2 重组蛋白抗病毒活性的初步检测 | 第43-44页 |
| 2.2.1 星状病毒TCID50 的测定 | 第43页 |
| 2.2.2 单一重组蛋白抗病毒活性检测 | 第43-44页 |
| 2.2.3 重组蛋白的联合抗病毒活性检测 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.1 重组蛋白的含量测定 | 第44-45页 |
| 3.2 星状病毒毒价（TCID50）的测定 | 第45-46页 |
| 3.3 单一重组蛋白抗病毒活性检测 | 第46-47页 |
| 3.4 重组蛋白联合抗病毒活性检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-64页 |
| 上海交通大学硕士学位论文答辩决议书 | 第64页 |
