优化类人胶原蛋白Ⅱ基因工程菌的培养基组成及流加操作
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| ·胶原蛋白概述 | 第8页 |
| ·类人胶原蛋白Ⅱ的优越性及应用 | 第8-9页 |
| ·高密度发酵及过程优化 | 第9-13页 |
| ·高密度发酵的影响因素 | 第9-11页 |
| ·高密度发酵的调控 | 第11-13页 |
| ·代谢流分析 | 第13-15页 |
| ·代谢流分析方法 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌初级代谢相关途径的代谢流分析 | 第14-15页 |
| ·响应面优化法 | 第15-16页 |
| ·Box-Behnken实验设计(BBD) | 第15-16页 |
| ·中心复合设计(CCD) | 第16页 |
| ·本研究的目的、意义及内容 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第18-24页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·菌种活化 | 第19页 |
| ·种子培养 | 第19页 |
| ·摇瓶培养实验 | 第19页 |
| ·发酵罐分批-补料培养 | 第19-21页 |
| ·菌体收集 | 第21页 |
| ·目标蛋白的分离 | 第21页 |
| ·分析方法 | 第21-24页 |
| ·酸等有机酸检测 | 第21页 |
| ·菌体浓度测定 | 第21页 |
| ·细胞干重测定 | 第21页 |
| ·残糖测定 | 第21-22页 |
| ·NH_2-R测定 | 第22页 |
| ·总蛋白测定 | 第22页 |
| ·类人胶原蛋白Ⅱ含量测定 | 第22页 |
| ·呼吸商 | 第22-24页 |
| 第三章 HPLC检测有机酸 | 第24-30页 |
| ·HPLC系统 | 第24页 |
| ·液相检测条件摸索 | 第24-26页 |
| ·波长选择 | 第24-25页 |
| ·流动相及浓度 | 第25页 |
| ·pH | 第25页 |
| ·温度 | 第25页 |
| ·乙腈添加量 | 第25-26页 |
| ·流速 | 第26页 |
| ·液相检测 | 第26-29页 |
| ·流动相的配制 | 第26页 |
| ·样品预处理 | 第26页 |
| ·保留时间的确定 | 第26-27页 |
| ·有机酸标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·进样分析 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 第四章 摇瓶发酵培养基的优化 | 第30-39页 |
| ·摇瓶发酵过程 | 第30页 |
| ·培养基组成的变化对菌体生长的影响 | 第30-33页 |
| ·培养基组成的变化对类人胶原蛋白Ⅱ表达量的影响 | 第33页 |
| ·培养基组成的变化对代谢副产物的影响 | 第33-38页 |
| ·甲酸 | 第34-35页 |
| ·L-苹果酸、琥珀酸、柠檬酸 | 第35-36页 |
| ·乳酸 | 第36页 |
| ·丙酸 | 第36页 |
| ·乙酸 | 第36-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第五章 发酵罐培养基的优化及发酵调控 | 第39-46页 |
| ·发酵参数控制 | 第39-41页 |
| ·pH值 | 第39-40页 |
| ·温度 | 第40页 |
| ·溶氧 | 第40-41页 |
| ·不同培养基的发酵培养 | 第41-45页 |
| ·不同碳氮比对细胞生长、类人胶原蛋白表达的影响 | 第41-43页 |
| ·不同碳氮比组成对重组大肠杆菌代谢流分布的影响 | 第43-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第六章 发酵罐补料培养基的流加优化 | 第46-55页 |
| ·发酵参数调控 | 第46页 |
| ·pH值 | 第46页 |
| ·温度 | 第46页 |
| ·溶氧 | 第46页 |
| ·流加操作优化 | 第46-50页 |
| ·流加操作方式的优化 | 第47页 |
| ·流加操作方式对发酵的影响 | 第47-50页 |
| ·不同补料培养基流加操作的发酵培养 | 第50-53页 |
| ·不同碳氮比流加操作对细胞生长,蛋白表达的影响 | 第50-52页 |
| ·不同补料碳氮比对重组大肠杆菌代谢流分布影响分析 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
