| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-17页 |
| 1.1 成骨细胞矿化 | 第13-14页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 细胞外基质与成骨细胞矿化 | 第13-14页 |
| 1.2 基质小泡 | 第14-15页 |
| 1.2.1 基质小泡定义 | 第14页 |
| 1.2.2 基质小泡介导的外基质矿化机制 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞粘合素 | 第15-16页 |
| 1.3.1 细胞粘合素概况 | 第15页 |
| 1.3.2 细胞粘合素与骨骼系统的关系 | 第15-16页 |
| 1.4 实验室前期工作 | 第16-17页 |
| 第二章 Saos-2 细胞体外矿化模型的建立及细胞粘合素C在时间依赖性矿化中表达量的变化 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 Saos-2 细胞培养 | 第19-21页 |
| 2.2.2 Saos-2 细胞种板 | 第21页 |
| 2.2.3 ALP染色及活性检测 | 第21-22页 |
| 2.2.4 茜素红染色及定量检测 | 第22-23页 |
| 2.2.5 Ca~(2+)检测 | 第23-24页 |
| 2.2.6 RT-qRCR | 第24-25页 |
| 2.2.7 Westen Blot检测转录因子Runx2的表达 | 第25-27页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 成功构建体外细胞矿化模型 | 第27-29页 |
| 2.3.2 细胞粘合素C随时间依赖性矿化的表达变化 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 RNAi技术下调细胞粘合素C的表达量 | 第32-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 Saos-2 细胞培养 | 第33页 |
| 3.2.2 Saos-2 细胞瞬时转染 | 第33-34页 |
| 3.2.3 RT-qPCR检测转染后细胞粘合素C在mRMA水平的表达 | 第34页 |
| 3.2.4 Western Blot检测转染后细胞粘合素C在蛋白水平的表达 | 第34页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 细胞粘合素C对矿化细胞表型的影响 | 第37-42页 |
| 4.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.1.1 细胞 | 第37页 |
| 4.1.2 试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 仪器 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 4.2.2 细胞诱导及瞬时转染 | 第38页 |
| 4.2.3 转染后ALP染色和活性检测 | 第38页 |
| 4.2.4 转染后茜素红染色及定量 | 第38页 |
| 4.2.5 转染后钙离子检测 | 第38页 |
| 4.2.6 RT-qPCR检测转染后矿化标志基因ALP和COL1A1的表达 | 第38页 |
| 4.2.7 Western Blot检测转染后转录因子Runx2的表达 | 第38页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第38页 |
| 4.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 下调细胞粘合素C的表达对基质小泡的影响 | 第42-49页 |
| 5.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 5.1.1 细胞 | 第42页 |
| 5.1.2 试剂 | 第42-43页 |
| 5.1.3 仪器 | 第43页 |
| 5.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 5.2.1 Saos-2 细胞在 75T一次性培养瓶培养 | 第43页 |
| 5.2.2 Saos-2 细胞瞬时转染 | 第43-44页 |
| 5.2.3 Saos-2 细胞基质小泡的提取 | 第44页 |
| 5.2.4 MVs中ALP活性的检测 | 第44页 |
| 5.2.5 MVs矿化能力的检测 | 第44-46页 |
| 5.2.6 Westen Blot检测基质小泡中矿化相关蛋白的表达量 | 第46页 |
| 5.2.7 统计学分析 | 第46页 |
| 5.3 实验结果 | 第46-47页 |
| 5.4 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
