VIGS技术解析陆地棉抗黄萎病相关基因及GhB2功能初步鉴定
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 棉花黄萎病 | 第14-18页 |
| 1.1.1 棉花黄萎病症状及为害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 棉花黄萎病原菌 | 第15页 |
| 1.1.3 黄萎病菌的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.1.4 棉花抗黄萎病机制 | 第16-18页 |
| 1.2 病毒诱导的基因沉默技术 | 第18-19页 |
| 1.3 cDNA末端快速扩增技术 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的意义及内容 | 第20-21页 |
| 1.4.1 研究目的意义 | 第20页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 陆地棉抗黄萎病相关基因表达分析 | 第21-31页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料和病菌 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 陆地棉的种植及培养 | 第22页 |
| 2.2.2 病菌的活化及接种 | 第22页 |
| 2.2.3 选取候选基因 | 第22页 |
| 2.2.4 RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.5 反转录cDNA合成 | 第23-24页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR | 第24页 |
| 2.2.7 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 抗黄萎病相关基因荧光定量分析 | 第26-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 VIGS技术分析抗黄萎病相关基因 | 第31-45页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.1 植物材料和病菌 | 第31页 |
| 3.1.2 载体与菌株 | 第31-32页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.5 主要试剂配制 | 第32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 植物材料种植 | 第32页 |
| 3.2.2 目的基因克隆 | 第32-35页 |
| 3.2.3 沉默载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.4 沉默载体转化农杆菌 | 第36-37页 |
| 3.2.5 棉株的接种 | 第37页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR法检测目的基因表达量 | 第37页 |
| 3.2.7 沉默植株抗病性鉴定 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 沉默载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.3.2 VIGS载体沉默GhChlⅠ | 第39页 |
| 3.3.3 目的基因表达量的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.4 沉默棉株抗病性鉴定 | 第40-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 陆地棉抗黄萎病相关基因GhB2的全长克隆 | 第45-57页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第45页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第45页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第45页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第45页 |
| 4.2 试验方法 | 第45-50页 |
| 4.2.1 植物材料种植 | 第45-46页 |
| 4.2.2 RNA提取 | 第46页 |
| 4.2.3 反转录cDNA合成 | 第46页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第46页 |
| 4.2.5 GhB2全长克隆 | 第46-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.3.1 GhB2基因的克隆 | 第50页 |
| 4.3.2 GhB2基因的生物信息学分析 | 第50-55页 |
| 4.3.3 GhB2表达组织特异性 | 第55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 GhB2超表达功能分析 | 第57-66页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第57-58页 |
| 5.1.1 植物材料和载体 | 第57页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第57页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第57页 |
| 5.1.4 主要试剂配制 | 第57-58页 |
| 5.2 试验方法 | 第58-62页 |
| 5.2.1 GhB2全长克隆 | 第58页 |
| 5.2.2 超表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 5.2.3 超表达载体转化农杆菌 | 第60页 |
| 5.2.4 浸花法转化Col-0 型拟南芥 | 第60页 |
| 5.2.5 卡那霉素筛选超表达拟南芥最适浓度 | 第60页 |
| 5.2.6 阳性株筛选 | 第60-61页 |
| 5.2.7 GhB2的表达分析 | 第61页 |
| 5.2.8 超表达植株抗病性鉴定 | 第61-62页 |
| 5.3 结果与分析 | 第62-65页 |
| 5.3.1 超表达载体构建 | 第62页 |
| 5.3.2 确定卡那霉素筛选超表达拟南芥最适浓度 | 第62-63页 |
| 5.3.3 转基因株筛选 | 第63-64页 |
| 5.3.4 超表达拟南芥黄萎病抗性鉴定 | 第64-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
