| 中英文缩略语表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一部分 CCNYL1在人食管鳞状细胞癌中甲基化与去甲基化研究 | 第13-57页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 材料与方法 | 第18-41页 |
| 1. 实验材料 | 第18-28页 |
| 1.1 组织样本 | 第18页 |
| 1.2 菌种、质粒及细胞株 | 第18-19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19-21页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.5 引物的合成与设计 | 第22-23页 |
| 1.6 重要试剂的配制 | 第23-28页 |
| 2. 研究方法 | 第28-41页 |
| 2.1 细胞处理 | 第28页 |
| 2.2 DNA甲基化测序 | 第28-29页 |
| 2.3 Bisulfite sequencing PCR检测 | 第29-32页 |
| 2.4 总RNA和总蛋白的提取 | 第32-34页 |
| 2.5 DNA、RNA和蛋白的浓度测定 | 第34页 |
| 2.6 逆转录(Reverse Transcription,RT)与PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.7 Western Blotting(WB) | 第35-37页 |
| 2.8 感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.9 转化 | 第37页 |
| 2.10 质粒提取及鉴定 | 第37-39页 |
| 2.11 质粒瞬时转染 | 第39页 |
| 2.12 细胞增殖实验 | 第39-40页 |
| 2.13 统计学分析 | 第40-41页 |
| 实验结果 | 第41-52页 |
| 1. 高通量测序分析ESCC组织的甲基化图谱及表达图谱 | 第41-45页 |
| 1.1 RRBS测序获得ESCC组织甲基化差异特征 | 第42-43页 |
| 1.2 ESCC组织差异基因功能富集 | 第43-44页 |
| 1.3 RRBS测序与芯片表达谱关联分析结果 | 第44-45页 |
| 2. BSP验证结果 | 第45-48页 |
| 2.1 CCNYL1基因DMR PCR扩增及单个CpG位点甲基化频率 | 第45-47页 |
| 2.2 CCNYL1基因DMR整体甲基化状态分析 | 第47-48页 |
| 3. CCNYL1基因表达水平 | 第48-49页 |
| 4. CCNYL1在细胞株中的研究 | 第49-52页 |
| 4.1 CCNYL1在体外细胞株中DNA甲基化、mRNA及蛋白的表达情况 | 第49-50页 |
| 4.2 5-aza-dC处理细胞株,CCNYL1甲基化水平降低,表达水平升高 | 第50页 |
| 4.3 过表达CCNYL1基因,抑制食管癌细胞生长 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-56页 |
| 展望 | 第56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 第二部分 HSD11B1L在人食管鳞状细胞癌中的DNA甲基化研究和预后分析 | 第57-80页 |
| 前言 | 第58-60页 |
| 材料与方法 | 第60-67页 |
| 1. 实验材料 | 第60-62页 |
| 1.1 组织样本 | 第60页 |
| 1.2 菌种及细胞株 | 第60页 |
| 1.3 主要试剂 | 第60-61页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第61页 |
| 1.5 引物的合成物设计 | 第61-62页 |
| 2. 研究方法 | 第62-67页 |
| 2.1 细胞处理 | 第62页 |
| 2.2 DNA甲基化测序 | 第62-63页 |
| 2.3 BSP检测 | 第63页 |
| 2.4 总RNA和总蛋白的提取 | 第63页 |
| 2.5 DNA、RNA和蛋白的浓度测定 | 第63页 |
| 2.6 PCR扩增 | 第63-64页 |
| 2.7 Western Blotting | 第64页 |
| 2.8 感受态细胞的制备 | 第64页 |
| 2.9 转化 | 第64页 |
| 2.10 质粒小量提取及鉴定 | 第64页 |
| 2.11 细胞增殖实验 | 第64页 |
| 2.12 Transwell实验 | 第64-66页 |
| 2.13 数据的获取及分析 | 第66-67页 |
| 实验结果 | 第67-76页 |
| 1. RRBS测序获得ESCC中转移与非转移组织DNA甲基化差异基因的功能富集 | 第67页 |
| 2. ESCC转移与非转移组织DNA甲基化差异基因与表达差异基因关联分析 | 第67-68页 |
| 3. RRBS测序结果验证 | 第68-69页 |
| 4. 表达谱芯片结果验证 | 第69页 |
| 5. HSD11B1L在细胞株中的研究 | 第69-76页 |
| 5.1 HSD11B1L在细胞株中的甲基化及表达水平呈负相关 | 第69-70页 |
| 5.2 敲除HSD11B1L基因,食管癌细胞株的体外增殖及迁移侵袭能力均下降 | 第70-73页 |
| 5.3 HSD11B1L基因甲基化与临床病理特征之间的关系 | 第73-75页 |
| 5.4 HSD11B1L甲基化与预后的关系 | 第75-76页 |
| 讨论 | 第76-79页 |
| 展望 | 第79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 文献综述 | 第84-91页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 硕士在读期间发表与待发表论文 | 第92-93页 |
| 基金资助 | 第93-94页 |
