| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写与符号 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 油菜的重要性 | 第15页 |
| 1.2 油菜突变体库构建的意义 | 第15-16页 |
| 1.3 植物突变体库的构建 | 第16-21页 |
| 1.3.1 物理化学诱变 | 第16-17页 |
| 1.3.2 生物诱变 | 第17-21页 |
| 1.4 植物T-DNA插入突变体的筛选方法 | 第21-23页 |
| 1.5 长链脂酰辅酶A合成酶(LACS) | 第23-24页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.7 主要研究内容和技术路线 | 第25-27页 |
| 1.7.1 主要研究内容 | 第25-26页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 突变体库的初建及通过Bar筛选转化植株 | 第27-37页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.1 载体和菌种 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 基本溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第30页 |
| 2.2 方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 含有激活标签载体pCB260农杆菌的预处理 | 第30-31页 |
| 2.2.2 农杆菌浸花法转化野生型甘蓝型油菜中双 11 | 第31页 |
| 2.2.3 除草剂初筛甘蓝型油菜突变体植株 | 第31-32页 |
| 2.2.4 油菜突变体植株PCR分子鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 2.3.1 除草剂筛选油菜转化植株 | 第34-35页 |
| 2.3.2 PCR检测油菜转化株 | 第35-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 通过绿色荧光蛋白筛选转基因种子 | 第37-47页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 种子萌发 | 第38页 |
| 3.2.2 绿色荧光筛选 | 第38-39页 |
| 3.2.3 荧光种子的生长 | 第39页 |
| 3.2.4 PCR分子鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-45页 |
| 3.3.1 绿色荧光筛选萌发的种子 | 第40页 |
| 3.3.2 筛选荧光种子的PCR鉴定 | 第40-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 激活标签载体的改造 | 第47-64页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47-50页 |
| 4.1.1 植物材料、载体和菌种 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.3 基本溶液的配制 | 第48页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第48-49页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第49-50页 |
| 4.2 方法 | 第50-58页 |
| 4.2.1 红色荧光蛋白基因片段的获得 | 第50-53页 |
| 4.2.2 Hind Ⅲ酶切pCB260载体 | 第53-54页 |
| 4.2.3 红色荧光蛋白基因片段与pCB260载体片段连接 | 第54页 |
| 4.2.4 连接产物转化大肠杆菌Top10 | 第54-55页 |
| 4.2.5 大肠杆菌Top10菌液PCR鉴定 | 第55页 |
| 4.2.6 重组子质粒提取 | 第55页 |
| 4.2.7 质粒浓度和质量检测 | 第55页 |
| 4.2.8 重组子酶切验证 | 第55-56页 |
| 4.2.9 Freeze-thaw法转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第56页 |
| 4.2.10 农杆菌GV3101菌液PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2.11 转化拟南芥 | 第57-58页 |
| 4.2.12 拟南芥种子红色荧光蛋白的观察 | 第58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-63页 |
| 4.3.1 含有红色荧光蛋白基因片段的获得 | 第58页 |
| 4.3.2 pCB260载体酶切后大片段回收 | 第58-59页 |
| 4.3.3 改造载体pCB260-HDsRed的构建 | 第59-60页 |
| 4.3.4 重组质粒pCB260-HDsRed酶切验证 | 第60-61页 |
| 4.3.5 重组子转化农杆菌GV3101的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3.6 拟南芥种子的观察 | 第62-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 油菜突变体的获得与表型分析 | 第64-68页 |
| 5.1 材料 | 第64页 |
| 5.1.1 材料 | 第64页 |
| 5.1.2 设备 | 第64页 |
| 5.2 方法 | 第64页 |
| 5.2.1 T_2代种子的含油量的检测 | 第64页 |
| 5.2.2 T_2代植株表型的观察 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-67页 |
| 5.3.1 转化株T_2代种子含油量的检测 | 第64-65页 |
| 5.3.2 其他突变体表型的观察 | 第65-67页 |
| 5.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第六章 甘蓝型油菜BnLACS9基因的研究 | 第68-84页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第68-71页 |
| 6.1.1 材料 | 第68页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第68-69页 |
| 6.1.3 基本溶液的配制 | 第69-70页 |
| 6.1.4 主要仪器 | 第70-71页 |
| 6.1.5 引物设计 | 第71页 |
| 6.2 方法 | 第71-76页 |
| 6.2.1 目的片段PCR扩增 | 第71页 |
| 6.2.2 目的片段回收 | 第71-72页 |
| 6.2.3 目的片段与pMD-18 载体进行连接 | 第72页 |
| 6.2.4 大肠杆菌感受态制备和转化 | 第72页 |
| 6.2.5 质粒提取 | 第72-73页 |
| 6.2.6 pBI121质粒和pMD-18:LACS9Promoter的双酶切 | 第73页 |
| 6.2.7 胶回收酶切产物 | 第73页 |
| 6.2.8 启动子连接pBI121载体 | 第73-74页 |
| 6.2.9 转化大肠杆菌Top10 | 第74页 |
| 6.2.10 验证提质粒 | 第74页 |
| 6.2.11 转化农杆菌GV3101 | 第74页 |
| 6.2.12 农杆菌转染拟南芥 | 第74页 |
| 6.2.13 拟南芥转基因种子筛选 | 第74-75页 |
| 6.2.14 GUS染色 | 第75页 |
| 6.2.15 叶绿素提取及浓度检测 | 第75-76页 |
| 6.2.16 淀粉粒的观察 | 第76页 |
| 6.2.17 种子含油量的测定 | 第76页 |
| 6.3 结果与分析 | 第76-82页 |
| 6.3.1 载体构建 | 第76-79页 |
| 6.3.2 BnLACS9基因组织表达模式 | 第79-80页 |
| 6.3.3 BnLACS9转基因油菜叶绿素含量分析 | 第80-81页 |
| 6.3.4 BnLACS9转基因油菜淀粉粒含量分析 | 第81页 |
| 6.3.5 BnLACS9转基因油菜种子含油量的测定 | 第81-82页 |
| 6.4 本章小结 | 第82-84页 |
| 第七章 总结与展望 | 第84-86页 |
| 7.1 工作总结 | 第84-85页 |
| 7.2 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 在学期间发表论文 | 第94页 |
| 在学期间参与的科研项目 | 第94页 |
