| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1. 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 基因组编辑技术 | 第10-15页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶介导的基因组编辑技术 | 第10-11页 |
| 1.1.2 类转录激活因子核酸酶介导的基因组编辑技术 | 第11-12页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas系统介导的基因组编辑技术 | 第12-14页 |
| 1.1.4 基因组编辑技术的研究现状及前景 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞内两种修复机制 | 第15-17页 |
| 1.2.1 非同源末端连接 | 第16页 |
| 1.2.2 同源重组 | 第16-17页 |
| 1.3 检测效率的方法 | 第17-20页 |
| 1.3.1 利用重组底物测量DSBs的末端连接 | 第17-18页 |
| 1.3.2 线性DNA底物再环化法 | 第18页 |
| 1.3.3 T7E1酶检测法 | 第18页 |
| 1.3.4 Surveyor检测法 | 第18页 |
| 1.3.5 高通量测序 | 第18-19页 |
| 1.3.6 高分辨率熔解度曲线 | 第19页 |
| 1.3.7 AFDA检测法 | 第19-20页 |
| 1.4 影响同源重组效率的一些因素 | 第20页 |
| 1.5 研究内容及目的 | 第20-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 相关基因及载体 | 第23-24页 |
| 2.1.5 常用培养基及溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.6 实验相关引物序列 | 第25-28页 |
| 2.1.7 相关软件 | 第28页 |
| 2.1.8 打靶位点 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-44页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第28-40页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第40-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-56页 |
| 3.1 载体构建的结果 | 第44-46页 |
| 3.1.1 gRNA三合一载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.2 不同大小的同源片段的获得 | 第45-46页 |
| 3.2 细胞培养的结果 | 第46-47页 |
| 3.2.1 人 293T细胞培养结果 | 第46页 |
| 3.2.2 转染3天后细胞结果图 | 第46-47页 |
| 3.3 打靶位点的同源重组效率结果 | 第47-56页 |
| 3.3.1 琼脂糖凝胶结果图 | 第47-49页 |
| 3.3.2 聚丙烯酰胺凝胶结果图 | 第49-52页 |
| 3.3.3 安捷伦仪器结果 | 第52-54页 |
| 3.3.4 位点的NHEJ琼脂糖凝胶结果 | 第54页 |
| 3.3.5 加入小分子物质后位点的检测结果 | 第54-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 小分子物质对同源重组效率的影响 | 第56页 |
| 4.2 两种检测HR效率方法的比较 | 第56-58页 |
| 5. 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |