| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要中英文缩写索引 | 第12-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-15页 |
| 第2章 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1 主要仪器和设备 | 第15页 |
| 2.2 菌株和细胞株 | 第15-16页 |
| 2.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.3.1 试剂盒 | 第16页 |
| 2.3.2 主要实验试剂 | 第16页 |
| 2.3.3 培养基及溶液 | 第16页 |
| 2.3.4 其他试剂 | 第16-17页 |
| 第3章 实验方法 | 第17-29页 |
| 3.1 Cps DNA模板的制备 | 第17-18页 |
| 3.1.1 制备单层HeLa细胞 | 第17页 |
| 3.1.2 鹦鹉热衣原体扩增 | 第17页 |
| 3.1.3 鹦鹉热衣原体DNA模板的制备 | 第17-18页 |
| 3.2 pET-30a(+)/MIP原核表达载体的构建及鉴定 | 第18-22页 |
| 3.2.1 MIP基因序列分析及寡核苷酸引物的设计 | 第18页 |
| 3.2.2 Cps MIP基因的PCR扩增及初步检测 | 第18-19页 |
| 3.2.3 PCR产物的纯化 | 第19页 |
| 3.2.4 提取pET-30a(+)质粒 | 第19-20页 |
| 3.2.5 PCR扩增产物以及pET-30a(+)空质粒的双酶切 | 第20页 |
| 3.2.6 Cps MIP基因与pET-30a(+)空质粒的亚克隆 | 第20-21页 |
| 3.2.7 感受态细菌的制备 | 第21页 |
| 3.2.8 重组质粒的转化 | 第21页 |
| 3.2.9 pET-30a(+)/MIP原核表达载体的鉴定 | 第21-22页 |
| 3.3 重组MIP蛋白的制备 | 第22-24页 |
| 3.3.1 Cps MIP蛋白的诱导表达 | 第22-23页 |
| 3.3.2 Cps MIP蛋白的大量表达 | 第23页 |
| 3.3.3 Cps MIP蛋白的纯化 | 第23页 |
| 3.3.4 蛋白浓度的测定 | 第23-24页 |
| 3.4 蛋白去内毒素后内毒素浓度的测定 | 第24页 |
| 3.4.1 细菌内毒素标准溶液配制 | 第24页 |
| 3.4.2 Cps MIP蛋白内毒素浓度测定 | 第24页 |
| 3.5 ELISA检测重组蛋白诱导THP-1 细胞产生细胞因子的情况 | 第24-26页 |
| 3.5.1 THP-1 细胞培养 | 第24页 |
| 3.5.2 不同浓度重组Cps MIP蛋白刺激THP-1 细胞 | 第24-25页 |
| 3.5.3 最适浓度重组Cps MIP蛋白刺激THP-1 细胞不同时间 | 第25页 |
| 3.5.4 ELISA检测IL-8、TNF-α | 第25-26页 |
| 3.6 细胞凋亡检测 | 第26-27页 |
| 3.6.1 Hoechst 33258 染色 | 第26页 |
| 3.6.2 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 3.7 统计学处理 | 第27-29页 |
| 第4章 实验结果 | 第29-39页 |
| 4.1 MIP的PCR扩增 | 第29页 |
| 4.2 重组质粒的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 4.2.1 双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 4.2.2 目的基因的测序鉴定 | 第30页 |
| 4.3 MIP蛋白的表达及纯化 | 第30-32页 |
| 4.3.1 MIP蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 4.3.2 MIP蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 4.3.3 BCA测定蛋白浓度 | 第32页 |
| 4.4 蛋白去内毒素后内毒素浓度的测定 | 第32页 |
| 4.5 Cps MIP重组蛋白对细胞因子的诱生作用 | 第32-35页 |
| 4.5.1 Cps MIP蛋白诱导THP-1 细胞产生IL-8 和TNF-α | 第32-35页 |
| 4.6 Cps MIP对HeLa细胞凋亡的影响 | 第35-39页 |
| 4.6.1 Hoechst 33258 染色 | 第35-36页 |
| 4.6.2 Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测 | 第36-39页 |
| 第5章 讨论 | 第39-43页 |
| 第6章 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 附录 | 第53-57页 |
| 文献综述 | 第57-67页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
